[发明专利]降解纸类垃圾产高木聚糖酶和低纤维素酶细菌的制备方法

说明书

技术领域

本专利属于生物技术，涉及一种降解纸类垃圾产高木聚糖酶和低纤维素酶细菌的制备方法。

背景技术

酶法制浆研究是传统化学制浆工艺的主要研究方向之一，木聚糖酶在制浆造纸工业中的应用已日益受到人们的重视。国外在这方面已进行了大量研究，例如，用木聚糖酶预处理纸浆可改变纸张特性，木聚糖酶产生菌如果产生大量的纤维素酶，这对于提高纸浆纤维得率是不利的，所以产高木聚糖酶和低纤维素酶的细菌具有很高的应用价值。

发明内容

本发明提供一种从土壤中分离得到降解纸类垃圾产高木聚糖酶和低纤维素酶细菌的制备方法。

为实现以上目的，本发明提出以下技术方案：

采用选择性培养基筛选并纯化能够降解滤纸的细菌。进行降解滤纸和毛巾纸试验，肉眼观察到上述纸质大量降解并进行纸质降解液纤维素酶和木聚糖酶等的检测。其步骤如下

  （1）野外取搀杂有大量腐烂至棕黄色或黑色木屑的土壤，置干净塑料袋中，在自然条件下风干7天。

  （2）利用铺有滤纸的ST21CX培养基筛选降解滤纸的细菌：配制放线菌酮液。在100mL经高压灭菌的ST21CX基础液中加放线菌酮液1mL，倒在平板上。取无菌滤纸铺于培养基上。将风干的土样无菌研磨至研钵内，研磨成细粉状，取适量使之均匀薄薄覆盖在铺有滤纸的ST21CX培养基上，28℃-30℃培养2～3周。

放线菌酮液：称取放线菌酮1.25g，用乙醇溶解后用水定容于100mL容量瓶中，加入95%乙醇50mL,振摇使溶解,加入蒸馏水至200mL，过滤除菌。

ST21CX基础液：g/l: KNO3  1.0;  K2HPO4.2H2O 1.0;  MgSO4.7H2O 1.0;  CaCl2.2H2O 1.0; FeCl3.6H2O  0.2;  琼脂粉 15；  pH 7.2-7.4。 

 （3）挑取能够明显降解滤纸的菌落分别在VY/2培养基上28℃-30℃培养,然后再次挑取单菌落进行纯化后, VY/2培养基上扩大培养。既得多种初步降解纸类垃圾细菌。

VY/2培养基: CaCl2·2H2O 0.1% 活性酵母粉0.5%  VB12 50μg/100ml 琼脂1.5%  pH 7.2。VB12灭菌后加入。

筛选方法：

（4）将所得细菌分别接种在5 ml Dubos 盐培养液内，在Dubos 盐培养液内中添加0．0５g滤纸， 28℃-30℃摇床培养一周。滤纸为盐培养液的唯一碳原。筛选一周内能完全降解滤纸的细菌, 既得降解纸类垃圾产高木聚糖酶和低纤维素酶目标菌。

    Dubos 盐培养液 ：g/l: K2HPO4.2H2O 1.0; KCl 0.5; MgSO4.7H2O 0.5; NaNO3  0.5; FeSO4.7H2O 0.01; pH 7.2-7.4，两滴10mM葡萄糖。

（5）接种筛选得到的降解纸类垃圾产高木聚糖酶和低纤维素酶目标菌100ul于CMC培养液，28℃-30℃摇床培养24小时，保存菌液。

    CMC培养液：每 100 ml 培养液含0.5g glucose, 0.1g NaNO3, 0.1g K2HPO4,0.1g KCl, 0.05g MgSO4。

检验实例：

（1）以本专利所得到的菌液100ul接种在纸质添加量1%（打印纸和毛巾纸）的Dubos 盐培养液内，30℃摇床培养7天，肉眼观察每天纸质降解的情况，第2天能够看到纸质的降解，第7天后看到纸质降解成肉松状浆液；测定两种细菌降解毛巾的效果高于滤纸降解率，最高达50%。

（2）利用DNS方法，检测纸质的降解液离心后滤液木聚糖酶活性最高达20U/ml，而纤维素酶活性几乎检测不到。

本发明的有益效果:该方法操作简单，能够高效的找到降解纸类垃圾产高木聚糖酶和低纤维素酶细菌，利用此类菌能够增加生物漂白后纸浆强度,提高生物漂白经济效果。

具体实施方式

本发明提供一种从土壤中分离得到降解纸类垃圾产高木聚糖酶和低纤维素酶细菌的制备方法。

为实现以上目的，本发明提出以下技术方案：

采用选择性培养基筛选并纯化能够降解滤纸的细菌。进行降解滤纸和毛巾纸试验，肉眼观察到上述纸质大量降解并进行纸质降解液纤维素酶和木聚糖酶等的检测。其步骤如下：

  （1）野外取搀杂有大量腐烂至棕黄色或黑色木屑的土壤，置干净塑料袋中，在自然条件下风干7天。