[发明专利]一种具有紫罗兰香气的发酵物及其生产方法与它的用途

权利要求书

1.一种具有紫罗兰香气的发酵物的生产方法，其特征在于所述的方法包括以下步骤：

A、种子培养

使用酵母浸膏、NaCl、葡萄糖、蛋白胨、微量元素液与去离子水制备含有酵母浸膏4-6g/L、NaCl 25-32g/L、葡萄糖0.1-0.4g/L、蛋白胨8-15g/L、微量元素液1.0mL/L的种子培养基；所述的微量元素液是含有H₃BO₃ 3.0g/L、MgSO₄ 1.8g/L、FeSO₄ 1.36g/L、C₄H₄KNaO₆·4H₂O 1.77g/L、CuCl₂·2H₂O0.03g/L、ZnCl₂ 0.02g/L、CoCl₂·6H₂O 0.04g/L的水溶液；

把所述种子培养基加到培养瓶中，用无机碱将该种子培养基的pH值调节至弱碱性，然后灭菌，再接入以所述种子培养基体积计0.1-5％解淀粉类芽孢杆菌Paenibacillus amylolyticus BM-B-340，然后在室温下培养80-120小时，得到种子液；

B、摇瓶发酵

使用酵母浸膏、NaCl、蛋白胨、叶黄素、上述微量元素液与去离子水制备含有酵母浸膏5.0-5.5g/L、NaCl 25-32g/L、蛋白胨8.5-12.0g/L、叶黄素180-200mg/L、微量元素液1.0mL/L的摇瓶发酵培养基；

把所述摇瓶发酵培养基加到培养瓶中，用无机碱将该摇瓶发酵培养基的pH值调节至弱碱性，然后灭菌，再在室温下接入在步骤A得到的种子培养基，接种量是以所述摇瓶发酵培养基体积计5-10％，在50-80rpm摇床中在温度28-34℃下培养80-120h，得到发酵液；

C、分离

将步骤B得到的发酵液进行离心分离，往其上清液中加入以所述上清液体积计1∶1有机溶剂，在室温下进行振荡萃取，分离得到的有机相进行挥干，得到具有紫罗兰香气的发酵物。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的无机碱是NaOH、KOH或Ca(OH)₂。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在步骤A与B中，所述弱 碱性pH值是7.2-7.4。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤C中，所述有机溶剂选自正己烷、氯仿、丙酮、乙醚、四氯化碳和/或石油醚。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤C中，有机相挥干是吹氮法、真空减压法或蒸馏法。

6.根据权利要求1-5中任一项权利要求所述方法得到的具有紫罗兰香气的发酵物，其特征在于它含有60.0-70.0mg/L 7，8-二氢-β-紫罗兰醇。

7.根据权利要求6所述的具有紫罗兰香气的发酵物，其特征在于7，8-二氢-β-紫罗兰醇是采用下述分析方法测定的：

准确吸取0.1μL含有7，8-二氢-β-紫罗兰醇的二氯甲烷溶液进行气-质联用分析；

HP 5890II型气相色谱分析条件为：石英毛细管柱20-M、柱长30m、膜厚1μm；升温程序：50℃保持5min，以升温速度4℃/min升温至200℃，在这个温度下保持25min；进样口温度200℃；

HP 5945A型质谱分析条件为：EI源、电离电压70eV、离子源温度200℃、接口温度200℃，检测器电压1KV，全范围扫描；

然后，准确称取权利要求6所述产品1.0mg，用二氯甲烷定容至100μL，得到待分析样品；准确吸取0.1μL样品按照与上述相同条件进行气-质联用分析；

这些测定结果通过下式计算得到步骤A中样品溶液中7，8-二氢-β-紫罗兰醇的含量：

7，8-二氢-β-紫罗兰醇含量(mg/L)＝7，8-二氢-β-紫罗兰醇质量(mg)/0.1μL。

8.根据权利要求6所述的具有紫罗兰香气的发酵物作为烟用香料的用途。