[发明专利]蜂蜜基因的提取方法

权利要求书

1.一种蜂蜜基因的提取方法，其特征在于按以下步骤顺序进行：

（1）取10 mL以上蜂蜜，加入等体积的pH为7.0~8.0的磷酸盐缓冲溶液，振荡1~3小时，充分混匀后离心，弃去上清液，加入3 mL pH为7.0~8.0的磷酸盐缓冲溶液溶解沉淀，离心，弃去上清液，保留沉淀物；

（2）加入1 mL裂解缓冲液于沉淀物中，充分悬浮，混匀，加入10 μL浓度为20mg/mL的蛋白酶K溶液，混匀，置65 ℃水浴加热45~60 min，不时摇动；所述的裂解缓冲液是十六烷基三甲基溴化铵、三羟甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸和氯化钠的混合水溶液，其中十六烷基三甲基溴化铵的浓度为50mmol/L，三羟甲基氨基甲烷的浓度为10mmol/L，乙二胺四乙酸的浓度为2mmol/L，氯化钠的浓度为400mmol/L，用盐酸调pH至8.0；

（3）取出，加入300 μl饱和氯化钠溶液，剧烈振荡2分钟，置于0 ℃下放置3~5 min，离心；

（4）取上清液，加入等体积的苯酚:氯仿:异戊醇体积比为25:24:1的混合溶液，混匀，离心；

（5）取上清液，加入等体积的氯仿:异戊醇体积比为24:1的混合溶液，混匀，离心；

（6）取上清液，加入十分之一体积的3 mol/L醋酸钠溶液，混匀，加入与混合液等体积的异丙醇，混匀，在-20 ℃放置2小时，离心，弃去上清液，保留沉淀物；

（7）取沉淀物用75~80%乙醇洗涤后，室温下将乙醇吹干，将沉淀在室温下干燥得蜂蜜DNA干品或将沉淀溶于pH8.0的TE溶液中，即得蜂蜜DNA试剂；所说的TE溶液中三羟甲基氨基甲烷的浓度为10mmol/L，乙二胺四乙酸的浓度为1mmol/L，其余为水。