[发明专利]一种微囊藻毒素MC-LR促二乙基亚硝胺DEN诱发大鼠肝癌模型建立的方法

权利要求书

1.一种微囊藻毒素MC-LR促二乙基亚硝胺DEN诱发大鼠肝癌模型建立的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)DEN联合微囊藻毒素MC-LR建立大鼠肝癌模型；

(2)形态学检测；

(3)病理学检测；

(4)GST-Pi蛋白表达含量检测。

2.根据权利要求1所述的一种微囊藻毒素MC-LR促二乙基亚硝胺(DEN)诱发大鼠肝癌模型的建立方法，其特征在于：所述步骤(1)更为具体的步骤为：

A、选取体重为150±5g SD雄性大鼠15只，给予一周的适应时间，在大鼠饲养期间定期用0.01％的笨扎溴铵溶液擦拭浸泡消毒鼠笼，及时更换垫料，饲养温度控制在25℃左右，并给予充分的食物和水源；

B、配制0.25％的DEN溶液和1mg/ml的藻毒素MC-LR甲醇溶液；

C、模型组为腹腔注射0.25％DEN溶液和1mg/ml的藻毒素MC-LR甲醇溶液，使DEN终浓度为10mg/kg，藻毒素终浓度为10μg/kg；

D、以上实验每五天给药一次，共处理4个月；

E、在不同时期，注意观察大鼠食欲，饮水，皮毛，精神等情况。

3.根据权利要求1所述的一种微囊藻毒素MC-LR促二乙基亚硝胺(DEN)诱发大鼠肝癌模型的建立方法，其特征在于：所述步骤(2)更为具体的步骤为：在每个月末以颈椎脱臼法处死大鼠，打开腹腔，完整地取出肝脏后用PBS缓冲液清洗，记录体重，肝重并计算肝重与体重之比，同时观察肝脏的颜色和质地，并拍照。

4.根据权利要求1所述的一种微囊藻毒素MC-LR促二乙基亚硝胺(DEN)诱发大鼠肝癌模型的建立方法，其特征在于：所述步骤(3)的病理学检测的具体操作方法为：取部分肝叶经用10％中性甲醛溶液固定24h，石蜡包埋，切片后经HE染色，用光镜观察细胞的变化。

5.根据权利要求1所述的一种微囊藻毒素MC-LR促二乙基亚硝胺(DEN)诱发大鼠肝癌模型的建立方法，其特征在于：步骤(4)所述的蛋白质含量测定的具体操作是：将冻存于-80℃冰箱肝组织取出后进行超声裂解，4℃条件下12000rpm/min离心10分钟后，取上清液进行蛋白质免疫印迹，检测GST-Pi的表达含量。