[发明专利]定量检测玉米赤霉烯酮的方法

权利要求书

1.一种检测玉米赤霉烯酮的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一，将ZEN半抗原分别与BSA和OVA偶联，得到偶联物ZEN-BSA和ZEN-OVA；

步骤二，用ZEN-OVA作为免疫原，采用常规方法制备抗ZEN的单克隆抗体；

步骤三，制备胶体金，用该胶体金标记抗ZEN的单克隆抗体，将标记后的单克隆抗体喷涂到金标垫上；

步骤四，在硝酸纤维素膜上进行ZEN-BSA、兔抗鼠抗体的喷涂，之后将所述喷涂后的硝酸纤维素膜放入牛血清白蛋白溶液中封闭；

步骤五，将所述金标垫、所述喷涂后的硝酸纤维素膜、样品垫和吸水垫组装成试纸条，干燥；

步骤六，根据已知不同浓度ZEN标准品的显色值，绘制ZEN浓度与显色值的标准曲线；

步骤七，取待测样品用甲醇提取，离心，取上清，并用稀释液稀释，根据该待测样品的甲醇提取液的显色值，通过标准曲线得到该待测样品提取液中的ZEN浓度。

2.如权利要求1所述的检测玉米赤霉烯酮的方法，其特征在于，所述步骤三中，所述胶体金的颗粒直径为25nm。

3.如权利要求1所述的检测玉米赤霉烯酮的方法，其特征在于，所述步骤三中，所述胶体金的制备包括如下步骤：将100ml的0.01％HAuCl₄溶液加热至沸腾，之后加入1ml的1％柠檬酸三钠溶液，煮沸7～10min，最后加三蒸水至100ml，制备得到25nm的胶体金溶液，所述百分数为质量体积百分数。

4.如权利要求1所述的检测玉米赤霉烯酮的方法，其特征在于，所述步骤三中，所述抗玉米赤霉烯酮的单克隆抗体在被标记之前经过透析除盐处理。

5.如权利要求1所述的检测玉米赤霉烯酮的方法，其特征在于，所述步骤三中，所述标记包括如下步骤：在搅拌的条件下，向胶体金溶液中加入抗玉米赤霉烯酮的单克隆抗体，使其终浓度达到3.6μg/mL，室温下孵育15min，用0.1mol/L K₂CO₃调节胶体金溶液的pH为6.5，然后加入10％BSA至BSA的终浓度为0.1％，10000rpm离心20min，弃上清，再用含1％BSA的2mM pH为8.0的硼酸盐缓冲液洗涤，共洗涤3次，最后加入含4％蔗糖、6％海藻糖、BSA和叠氮钠分别为1％和0.05％的2mM pH为7.4的硼酸盐缓冲液中，即完成标记，所述百分数为质量体积百分数。

6.如权利要求1所述的检测玉米赤霉烯酮的方法，其特征在于，所述步骤五中，所述干燥为37℃烘箱干燥。

7.如权利要求1所述的检测玉米赤霉烯酮的方法，其特征在于，所述步骤七中，所述甲醇为80％的甲醇，所述百分数为体积百分数。

8.如权利要求1所述的检测玉米赤霉烯酮的方法，其特征在于，所述步骤七中，所述离心为2500g离心15分钟。

9.如权利要求1所述的检测玉米赤霉烯酮的方法，其特征在于，所述步骤七中，所述稀释液为含10％甲醇的0.05M pH为7.4的PBST，所述百分数为体积百分数。