[发明专利]一种人白血病细胞胞质体的制备及鉴定方法

权利要求书

1.一种人白血病细胞胞质体的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

第一，取对数生长期人白血病HL-60细胞，离心后去上清，沉淀用培养基悬浮，取Percoll溶液于离心管中，将上述细胞悬液铺于Percoll溶液面，离心去除白膜层，沉淀用无血清DMEM悬浮，得到纯化的HL-60细胞悬液；

第二，将上述纯化的HL-60细胞悬液加入细胞松驰素和秋水酰碱，孵育，离心去除上清，留细胞沉淀；

第三，将上述的细胞沉淀再悬浮于含细胞松驰素的Percoll溶液中，加入超速离心管中配平，转子提前预热，水平离心吸弃上清，收集Percoll液面上的部分，加入预冷的DMEM混匀，离心去除上清，沉淀用DMEM悬浮，再离心去除上清，沉淀用DMEM悬浮，得到胞质体悬液；

第四，将上述的胞质体悬液铺于Percoll液面上，水平离心吸取白膜层，加入DMEM混合，离心除去上清，用DMEM悬浮，得到人白血病细胞胞质体。

2.根据权利要求1所述的一种人白血病细胞胞质体的制备方法得到人白血病细胞胞质体的鉴定方法，其特征在于：采用荧光双染色鉴定人白血病细胞胞质体：向人白血病细胞胞质体悬液中加4,6-联脒-2-苯基吲哚二盐酸盐储存液,再加入羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯储存液，混匀，避光孵育，离心去上清；再加入PBS悬浮，离心去上清，此步骤再重复二次，PBS悬浮沉淀，将液体移入24孔板，沉降，用荧光显微镜观察结果。