[发明专利]一种微生物总基因组DNA的提取方法

权利要求书

1.一种微生物总基因组DNA的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将TENP洗液加入待提取样品中，再经过8000rpm，4℃，离心得到沉淀；

（2）向所述沉淀加入裂解液和溶菌酶溶液，于37℃进行水浴后，充分涡旋震荡；

（3）加入SDS溶液和蛋白酶K溶液，依次于55℃、70℃下进行水浴，于17000g，4℃，离心得上清；

（4）用等体积的酚/氯仿/异戊醇抽提液对所述步骤（3）得到的上清进行抽提，经离心得上清，重复用等体积的酚/氯仿/异戊醇抽提液抽提一次；

（5）用等体积的氯仿/异戊醇抽提液抽提，离心得上清；

（6）向所述步骤（5）得到的上清中加入异丙醇，室温下静置，离心得到DNA沉淀；

（7）用乙醇将所述DNA沉淀重悬，离心后弃上清，经干燥得到沉淀；

（8）用TE溶液将所述步骤（7）得到的沉淀溶解，得到所述微生物总基因组DNA，置于-20℃保存备用。

2.如权利要求1所述的微生物总基因组DNA的提取方法，其特征在于，当所述待提取样品是含有水分的，所述步骤（2）中进行水浴前还加入玻璃珠，并对待提取样品进行涡旋震荡。

3.如权利要求1所述的微生物总基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述的步骤（1）中TENP洗液pH为8~10，添加量为1.5~3mL，优选添加量为2mL。

4.如权利要求2所述的微生物总基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述TENP洗液成分为50 m mol/L Tris，20 m mol/L EDTA，l00 m mol/L NaCl，0.5%~2.5%w/v聚乙烯基吡咯烷酮；其中，聚乙烯基吡咯烷酮的优选添加量为1%w/v。

5.如权利要求1所述的微生物总基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述的步骤（2）中，所述裂解液成分为1M Tris-HCl，0.5M EDTA，0.5M Na₃PO4，1.5M NaCl，1% CTAB；所述溶菌酶溶液添加量为200~400μL，浓度为10-80mg/mL。

6.如权利要求1所述的微生物总基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述的步骤（3）中，SDS溶液浓度为20%~25%w/v，添加量为100~200μL；蛋白酶K浓度为15-30mg/mL，添加量为50~100μL。

7.如权利要求1所述的微生物总基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述的步骤（4）中酚/氯仿/异戊醇抽提液中酚、氯仿、异戊醇的体积比例为25:24:1。

8.如权利要求1所述的微生物总基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述的步骤（5）中氯仿/异戊醇抽提液中氯仿、异戊醇的体积比例为24:1。

9.如权利要求1所述的微生物总基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述的步骤（6）中所述异丙醇的加入体积是步骤（5）得到的上清体积的0.6倍。

10.如权利要求1所述的微生物总基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述的步骤（7）中所述乙醇为预冷的70%乙醇，添加量为1~1.5mL。