[发明专利]一种马钱子总碱的提取分离纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种中药有效成分的提取方法，特别是涉及一种从中药马钱子中提取马钱子碱的方法，属于药物技术领域。

背景技术

马钱子又名番木鳖，始载于《本草纲目》，味苦，寒性，有大毒，归肝，脾经，功效为通络止痛，散结消肿。临床上用于风湿顽痹，麻木瘫痪，跌打损伤，痈疽肿痛，小儿麻痹后遗症，类风湿性关节炎等疾病；但具有剧毒的特性严重影响其在临床上的应用，所谓“毒药猛剂善起沉疴”。马钱子的治疗量为0.3-0.6g，过量易出现中毒，如何合理安全使用马钱子，成为近年的研究热点之一。

研究表明，总生物碱是马钱子中最主要的有效部位，包括马钱子碱、士的宁、番木鳖次碱、马钱子新碱、番木鳖甙、依卡精等，其中的主要生物碱成分中马钱子碱具有抗炎、镇痛作用，士的宁则是中枢神经兴奋剂，主要在临床上治疗面瘫，神经麻痹等，同时也是主要的毒性成分，基本无抗炎、镇痛作用；文献报道小鼠灌服士的宁、马钱子碱、马钱子仁的LD50分别为3.27mg/kg、233mg/kg和234.5mg/kg；小鼠腹腔注射上述药物的LD50分另为1.53mg/kg、69.77mg/kg和76mg/kg，其口服中毒剂量成人为5～10mg，口服致死量为30mg。表明士的宁是马钱子中的主要毒性成分。有文献报道，分别用士的宁和马钱子碱给小鼠灌胃，两者的LD₅₀分别为3.27mg/kg和233mg/kg，由此可以得知士的宁的安全性很低，如果能除去马钱子总生物碱中的部分士的宁，则既能降低其毒性，又能保留其原有的抗炎镇痛的药理活性，提高临床用药的安全性。因此，现代研究中需要一种能降低士的宁含量的马钱子总碱的提取方法。有文献报道，分别用士的宁和马钱子碱给小鼠灌胃，两者的LD₅₀分别为3.27mg/kg和233mg/kg，由此可以得知士的宁的安全性很低，如果能除去马钱子总碱中的部分士的宁，则既能降低其毒性，又能保留其原有的抗炎镇痛的药理活性，提高临床用药的安全性。因此，现代研究中需要一种提纯高纯度马钱子碱的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高纯度马钱子碱的提取分离纯化方法，主要是利用马钱子碱的特性及马钱子碱和士的宁的不同性质来提取分离纯化。

本发明是通过以下技术方案实现的：

(1)马钱子总碱的提取：可选用酸水提取-有机溶剂萃取法、醇提取-有机溶剂萃取法、碱化-有机溶剂提取法中的一种方法得到马钱子总碱，其中有机溶剂是指甲苯、氯仿、乙酸乙酯中的一种；

(2)马钱子碱粗品的制备：可选用溶剂提取法(溶剂是指甲醇、水、碱水、乙酸乙酯溶液中的一种，萃取溶剂是指甲苯、氯仿、乙酸乙酯中的一种)、柱层析法、盐酸盐-硫酸盐分步结晶法中的一种。

(3)马钱子碱的纯化：可选用盐酸盐-硫酸盐分步结晶法、柱层析法中的一种。

具体来说，当步骤(2)采取溶剂提取法时，步骤(3)采取盐酸盐-硫酸盐分步结晶法、柱层析法中的一种；

当步骤(2)采取柱层析法时，步骤(3)采取盐酸盐-硫酸盐分步结晶法；

当步骤(2)采取盐酸盐-硫酸盐分步结晶法时，步骤(3)采取柱层析法。

上述步骤(1)、步骤(2)、步骤(3)中的方法任意组合均可制备得到纯度90％以上的马钱子碱，包括可得到纯度98％以上的马钱子碱单体。

下面对其所述及的提取、分离、纯化的方法的具体步骤说明如下：

1、酸水提取-有机溶剂萃取法：取马钱子粉碎成粗粉，加酸水提取，合并提取液，过滤，浓缩，碱化后加有机溶剂萃取，合并萃取液，减压回收有机溶剂，干燥，粉碎，即得马钱子总碱；

酸水提取-有机溶剂萃取法中的酸液是指0.5mol/L-5mol/L的盐酸、0.5mol/L-2mol/L的硫酸、0.5mol/L-5mol/L盐酸乙醇溶液、0.5mol/L-2mol/L硫酸乙醇溶液中的一种；酸液用量为5-12倍量，加热回流次数为1-3次，每次0.5-2小时；提取方法为渗漉法，回流法、搅拌法中的一种，优选的方案是酸液是指1mol/L的盐酸；加热回流法；酸液用量10倍量；加热回流2次，每次1.5小时。马钱子粗粉经酸液提取过滤后，滤液调整pH值至10-11；

萃取溶剂是指甲苯、氯仿、乙酸乙酯中的一种，优选为乙酸乙酯。其中乙酸乙酯的用量为0.5-4倍量，萃取次数为2-6次；优选1倍量，萃取4次。