[发明专利]分子烙印技术分离纯化石杉碱甲的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种分子烙印技术分离纯化石杉碱甲的方法。

背景技术

石杉碱甲(Huperzine A，简称Hup A)，又名福定碱，是从石杉科石杉属蛇足杉(千层塔)中分离得到的一种天然生物碱，属强效的可逆性乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制剂，对早老性痴呆症、单纯记忆障碍以及重症肌无力症治疗有显著疗效，且药效持续时间较长，无严重不良反应，是目前国内外上述病症最有效的药物，深受关注。由于它的治疗指数高，且作用时间长，在国际上已被列为第二代胆碱酯酶的抑制剂之一。但Hup A在自然界中存在量极低，且含有大量杂质，分离纯化困难。

目前现有一些有关制备石杉碱甲的专利文献如下：

1、《一种从千层塔中提取分离石杉碱甲的方法》(中国专利，CN101134743A)用有机溶剂提取，调酸；依次经阳离子交换树脂色谱分离和硅胶色谱分离，结晶，得纯度达98％的石杉碱甲。

2、《从中草药千层塔中提取石杉碱甲的方法》(中国专利，CN1448390A)应用以下工艺步骤制备石杉碱甲：原料粉碎→浸渍→浓缩→萃取(反复)→柱层析→结晶→高效液相色谱选段→浓缩干燥→成品，纯度98％以上。

3、《一种石杉碱甲的制备方法》(中国专利，CN101602727A)采用千层塔为原料，经以下步骤：原料粉碎→酸液超声提取→阴离子交换树脂除杂→氯仿萃取→减压回收→大孔吸附树脂分离→乙醇水洗脱→减压回收→结晶→干燥，得到石杉碱甲成品，纯度95％。

4、《一种石杉碱甲的提纯方法》(中国专利，CN10880259A)采用以下步骤：原料粉碎→酸水加热提取→膜过滤除杂浓缩→氨化氯仿萃取浓缩→中压氧化铝柱层析→氯仿甲醇重结晶→干燥，得成品，纯度98％。

5、《一种泡沫分离法分离千层塔中石杉碱甲的方法》(中国专利，CN101747275A)所述方法为：千层塔浸膏溶于乙醇，然后和阴离子表面活性剂加入泡沫分离塔内，搅拌均匀后从塔底连续鼓入空气，形成泡沫，收集泡沫直至无泡沫产生，得到的泡沫由塔顶排出泡沫液，搅拌反应，过滤取滤饼得石杉碱甲粗品，用重结晶的溶剂进行重结晶，干燥得石杉碱甲成品，纯度65％左右。

6、《一种高纯度石杉碱甲的制备方法》(中国专利，CN1587260A)用正构烷烃-脂肪醇-水作为溶剂体系，用高速逆流色谱法从石杉植物千层塔中分离高纯度石杉碱甲，纯度99％。

7、《一种从千层塔中提取分离高纯度石杉碱甲的新方法》(中国专利，CN101693689A)采用原料粉碎浸泡→大孔吸附树脂预分离→高速逆流色谱纯化，最后获得纯度98％以上的石杉碱甲。

上述各种方法，中国专利CN101134743A、中国专利CN101602727A、中国专利CN10880259A虽然分离出的石杉碱甲纯度较高，但工艺复杂、有机溶剂用量多、耗时长、成本高，不适合工业化生产；中国专利CN101747275A分离出的石杉碱甲纯度较低；中国专利CN1448390A、中国专利CN1587260A、中国专利CN101693689A分别采用高效液相色谱法和高速逆流色谱法分离石杉碱甲，得到产品纯度较高，但生产量小，设备昂贵，大多局限于实验室应用。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种分子烙印技术分离纯化石杉碱甲的方法，采用该方法制备石杉碱甲具有安全、操作简便、成本低、生产周期短、纯度高等特点。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种分子烙印技术分离纯化石杉碱甲的方法，包括以下步骤：

1)、将千层塔粉碎后投入超声逆流萃取器中，加入质量浓度为0.5～1.2％酒石酸水溶液，超声逆流萃取30～50分钟；千层塔与酒石酸水溶液的料液比为：1kg千层塔/5～10L的酒石酸水溶液；

所得的提取液减压浓缩至1/3～1/10体积，得浓缩提取液；在浓缩提取液中加入活性炭进行脱色处理，得脱色处理后提取液；

2)、将脱色处理后提取液上固相柱，固相柱内装有作为固定相的石杉碱甲分子烙印聚合物，先用体积浓度为5～10％的乙醇水溶液或甲醇水溶液进行淋洗，淋洗液弃去；再用体积浓度为40～50％的乙醇水溶液或甲醇水溶液进行淋洗至淋洗液无色，淋洗液弃去；拆柱将柱中的固定相取出，用体积浓度为60～70％乙醇水溶液或甲醇水溶液抽提固定相中被吸附的石杉碱甲单体，得抽提液；

所述石杉碱甲分子烙印聚合物中的石杉碱甲与千层塔中的石杉碱甲的摩尔比为1～1.1∶1；

3)、将上述抽提液减压浓缩，再用溶剂重结晶，得石杉碱甲。