[发明专利]肺炎克雷伯菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)

权利要求书

1.一种实时荧光RT-PCR法检测肺炎克雷伯菌的试剂盒，该试剂盒包括：(1)DNA提取液；PCR检测试剂：KP PCR反应液A、KP PCR反应液B；质控品：阴性质控品、KP阳性质控品，和(2)分隔并集中包装这些试剂瓶或管的包装盒，其中KP PCR反应液A由对应的PCR反应Buffer、正向引物、反向引物、寡核苷酸探针、纯水组成，其特征在于用于靶多核苷酸扩增的正向和反向引物的序列分别是5’-GCGCGCACCTATTGTGTTG-3’和5’-TCGCTGTGCTTGTCATCCTT-3’；

靶多核苷酸扩增和监测体系的寡核苷酸探针的序列是5’X-CCGTCTACACCCGGGCGCC-Y 3’，其中X/Y表示荧光标记检测体系，包括能够与靶多核苷酸结合并且两末端分别结合有荧光发生基团和荧光淬灭基团的寡核苷酸探针。

2.根据权利要求1的试剂盒，其特征还在于阴性质控品为生理盐水、正常人或其它病毒感染者的咽拭子，鼻咽分泌物或痰液样本。

3.根据权利要求1的试剂盒，阳性质控品为重组质粒pGEM-T-KP或KP阳性的咽拭子，鼻咽分泌物或痰液样本，其特征还在于阳性质控品包含下列序列或80％同源的核苷酸序列：

GCGCGCACCTATTGTGTTGGCCGTCTACACCCGGGCGCCTAACAAGGATGACAAGCACAGCGA。

4.根据权利要求1的试剂盒，其特征还在于RT-PCR反应酶系包含耐热DNA聚合酶、UDG酶和dUTP。

5.根据权利要求1的试剂盒，其特征还在于反应体系中引物最终浓度为0.4umol/ml，探针最终浓度为0.2umol/ml。

6.根据权利要求1的试剂盒，其特征还在于反应体系中引物Mg²⁺最终浓度为3mM。

7.根据权利要求1的试剂盒，其特征还在于反应体系中最终引物退火温度为55摄氏度。