[发明专利]用于表达miRNA和/或蛋白的载体及其应用

权利要求书

1.一种表达载体，是由线性载体pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR和两端各有一个粘性末端的双链DNA片段连接而成的环状表达载体；所述线性载体pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR的两个末端和所述双链DNA片段的两个粘性末端相连，并且两个连接处均形成限制性内切酶BsmB I的识别位点。

2.根据权利要求1所述表达载体，其特征在于：所述双链DNA片段的内部具有限制性内切酶Dra I的识别位点。

3.根据权利要求1或2所述表达载体，其特征在于：

所述DNA片段的一条链为如下a)-c)中：

a)其核苷酸序列为序列表中序列2；

b)其核苷酸序列为在序列表中序列2的第11位和第12位核苷酸之间再插入1-50个脱氧核糖核苷酸后所组成的序列；所述1-50个脱氧核糖核苷酸不含有如下序列或其反向互补序列：5′-CGTCTC-3′；

c)其核苷酸序列为序列表中序列4；

所述DNA片段的另一条链为如下d)-f)中的任一种：

d)其核苷酸序列为序列表中序列3；

e)其核苷酸序列为在序列表中序列3的第11位和第12位核苷酸之间再插入1-50个脱氧核糖核苷酸后所组成的序列；所述1-50个脱氧核糖核苷酸不含有如下序列或其反向互补序列：5′-CGTCTC-3′；

f)其核苷酸序列为序列表中序列5；

所述双链DNA片段的两条链除两端的粘性末端外，其余的核苷酸序列均反向互补。

4.根据权利要求1-3中任一所述的表达载体，其特征在于：所述双链DNA片段的一条链的核苷酸序列为序列表中序列6；所述双链DNA片段的另一条链的核苷酸序列为序列表中序列7。

5.根据权利要求1-4中任一所述表达载体，其特征在于：所述表达载体的核苷酸序列为序列表中的序列1。

6.制备权利要求1-5中任一所述表达载体的方法，包括将所述线性载体pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR的两个末端和所述双链DNA片段的两个粘性末端相连，并且使连接处形成限制性内切酶BsmB I的识别位点的步骤。

7.权利要求1-5中任一所述的表达载体在表达miRNA中的应用。