[发明专利]30种氨基酸同时定量检测方法及试剂盒制备

权利要求书

1.一种高灵敏30种氨基酸同时定量检测试剂盒，其特征在于由特定浓度的稳定同位素内标样本、质控样本、衍生化试剂、流动相调节液组成。

2.根据权利1所述的30种氨基酸同时定量检测试剂盒的制备方法，其特征在于包括如下步骤：(1)稳定同位素内标冻干粉的制备；(2)质控样本的配制；(3)衍生化试剂的制备；(4)流动相调节液的配制。

3.一种30种氨基酸同时定量检测方法，包括：

(1)浓缩储备液和日常工作液的配制：

取“稳定同位素内标冻干粉”用有机溶剂充分溶解，混匀，即为浓缩储备液，使用效期1个月；浓缩储备液用有机溶剂稀释适宜倍数，即为日常工作液，使用效期1周。

(2)样本预处理：

取一定量的样本，加入日常工作液，涡流，高速离心取上清液，吹干或冻干或挥干，加入适量的衍生化试剂衍生化一定时间，吹干或冻干或挥干，加入复溶液复溶。

(2)液相分离：

a.采用C₁₈、C₈或氰基键和硅胶作固定相；

b.流动相：甲醇；乙腈；乙酸；甲酸；三氟乙酸；七氟丁酸；乙酸铵；甲酸铵；二乙胺；三乙胺；等度或梯度洗脱；控制流速。

(3)质谱测定：电喷雾离子源；大气压化学电离源；正离子方式。

4.根据权利3所述的30种氨基酸同时定量检测方法，其特征在于同时定量检测30种氨基酸(精氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、天门冬氨酸、瓜氨酸、谷氨酸、缬氨酸、甘氨酸、酪氨酸、丙氨酸、鸟氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、苏氨酸、色氨酸、组氨酸、γ-氨基丁酸、丝胺酸、牛磺酸、脯氨酸、半胱氨酸、同型半胱氨酸、α-氨基正丁酸、肌氨酸、δ-羟基赖氨酸、羟基脯氨酸、1-甲基组氨酸、3-甲基组氨酸、焦谷氨酸)中的一种或多种，包含且不限于此30种氨基酸。

5.根据权利3所述的30种氨基酸同时定量检测方法，其特征在于用乙腈、甲醇、三氯醋酸或高氯酸等蛋白沉淀剂进行蛋白沉淀。

6.根据权利3所述的30种氨基酸同时定量检测方法，其特征在于用盐酸正丁醇进行衍生化处理。

7.根据权利3所述的30种氨基酸同时定量检测方法，其特征在于用稳定同位素内标进行定量检测。

8.根据权利3所述的30种氨基酸同时定量检测方法，其特征在于其所使用的流动相为：甲醇；乙腈；乙酸；甲酸；三氟乙酸；七氟丁酸；乙酸铵；甲酸铵；二乙胺；三乙胺；反相色谱等度或梯度分离。