[发明专利]细胞片智能分离用共聚纳米复合水凝胶及其制备方法与应用

权利要求书

1.细胞片智能分离用共聚纳米复合水凝胶的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）将锂藻土分散于水中，搅拌得到均匀透明的分散液；

（2）先加入聚乙二醇大单体搅拌均匀，再加入N-异丙基丙烯酰胺单体继续搅拌，其中，锂藻土相对于整个反应体系的质量百分比浓度为2% ~ 7%，N-异丙基丙烯酰胺单体相对于整个反应体系的质量百分比浓度为8% ~ 10%，聚乙二醇大单体相对于整个反应体系的质量百分比浓度为0.06% ~ 10%；

（3）充分搅拌均匀后除氧，加入相对于整个反应体系的质量百分比浓度为0.1% ~ 0.2%的引发剂，搅拌后将反应液注入玻璃试管及模具中并密封；

（4）将反应体系置于15 ~ 25 ℃下反应即得到细胞片智能分离用共聚纳米复合水凝胶。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中使用的锂藻土为Rockwood公司生产的Laponite XLS型或Laponite RDS型溶胶型产品。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述步骤（3）中加入的引发剂为氧化还原引发体系，包括过硫酸钾和四甲基乙二胺。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于制备过程均在无菌实验室中完成，用水均为无菌水。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤（4）还包括将制备的共聚纳米复合水凝胶从模具中取出，放入到无菌水中反复溶胀和去溶胀以去除未反应物质及其他杂质。

6.由权利要求1~5任意一项所述制备方法制得的具有温敏性的细胞片智能分离用共聚纳米复合水凝胶。

7.权利要求6所述共聚纳米复合水凝胶的应用，其特征在于将纯化后的共聚纳米复合水凝胶用于细胞培养及细胞片的快速脱附，包括如下步骤:

（1）将纯化好的共聚纳米复合水凝胶用模具切成圆片，浸泡在细胞培养液中在37 ℃的二氧化碳培养箱中预培养；

（2）在预培养后的共聚纳米复合水凝胶表面种植细胞并在37 ℃的二氧化碳培养箱中培养，并在设定天数下采用血球计数板对凝胶表面的细胞计数；

（3）待细胞铺满凝胶表面形成细胞片后，更换培养液，降低凝胶所处环境温度至室温，使细胞片从水凝胶表面自动快速脱附。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于所述培养液包括DMEM培养液；所述细胞包括鼠成纤维细胞L929。