[发明专利]一种强肝药物的指纹图谱的建立方法

权利要求书

1.一种强肝药物指纹图谱的建立方法，所述强肝药物由茵陈、板蓝根、当归、白芍、丹参、郁金、黄芪、党参、泽泻、黄精、地黄、山药、山楂、秦艽、甘草、六神曲组成，所述建立方法包括采用高效液相色谱法检测所述强肝药物成分，其中，所述高效液相色谱法的条件包括：

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充材料；

流动相：流动相A为乙腈，流动相B为0.05％体积分数磷酸水溶液，进行梯度洗脱，

所述梯度洗脱程序如下，其中流动相比例均为体积百分比：

0～15min，流动相A为0～10％，流动相B为100％～10％；

15～50min，流动相A为10％～30％，流动相B为90％～70％；

50～65min，流动相A为30％～60％，流动相B为70％～40％；

65～75min，流动相A为60％～100％，流动相B为40％～0％；

75～85min，流动相A为0％～100％，流动相B为100％～0％；

优选地，所述高效液相色谱法的条件还包括：

流速：1.0mL/min；

柱温：30℃；

检测波长：210nm～400nm；

理论塔板数按芍药苷峰计算，应不低于6000。

2.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于，所述建立方法还包括通过以下步骤制备对照品溶液：取芍药苷对照品适量，加入甲醇溶解制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。

3.根据权利要求1或2所述的建立方法，其特征在于，所述建立方法还包括通过以下步骤制备供试品溶液：取所述强肝药物成分1.0～1.2g，置于锥形瓶中，加入70％体积分数甲醇水溶液100ml，超声提取1h，放冷，离心约10min，取上清液浓缩至约10ml，用25ml水溶解，置分液漏斗中，用水饱和正丁醇萃取3次，每次用量为30ml、20ml、20ml，合并3次萃取液，浓缩至干，用甲醇溶解转移至10ml容量瓶中，用0.45μm滤膜滤过，弃去初滤液，取续滤液即得。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的建立方法，其特征在于，所述高效液相色谱法检测所述强肝药物成分包括以下步骤：

1)制备对照品溶液：取芍药苷对照品适量，加入甲醇溶解制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；

2)制备供试品溶液：取所述强肝药物成分1.0～1.2g，置于锥形瓶中，加入70％体积分数甲醇水溶液100ml，超声提取1h，放冷，离心约10min，取上清液浓缩至约10ml，用25ml水溶解，置分液漏斗中，用水饱和正丁醇萃取3次，每次用量为30ml、20ml、20ml，合并3次萃取液，浓缩至干，用甲醇溶解转移至10ml容量瓶中，用0.45μm滤膜滤过，弃去初滤液，取续滤液即得；

3)测定：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl注入高效液相色谱仪，根据以下色谱条件进行测定，得到指纹图谱：

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充材料；

流动相：流动相A为乙腈，流动相B为0.05％体积分数磷酸水溶液，进行梯度洗脱；

流速：1.0mL/min；

柱温：30℃；

紫外检测波长：230nm。

5.根据权利要求1至4中所述的建立方法，其特征在于，所述梯度洗脱程序按如下，其中流动相比例均为体积百分比：

0～15min，流动相A为0～10％，流动相B为100％～10％；

15～50min，流动相A为10％～30％，流动相B为90％～70％；

50～65min，流动相A为30％～60％，流动相B为70％～40％；

65～75min，流动相A为60％～100％，流动相B为40％～0％；

75～85min，流动相A为0％～100％，流动相B为100％～0％。