[发明专利]一种基于溶剂萃取耦合FTIR快速分析磷脂的方法

说明书

(一)技术领域

本发明涉及一种磷脂的测量方法，特别涉及一种基于溶剂萃取耦合FTIR快速分析磷脂的方法。

(二)背景技术

磷脂，作为膳食成分之一，对人体有许多生理功能，如调节脂肪代谢，转运必需脂肪酸，预防动脉硬化、高血压、血栓、及溃疡等疾病。磷脂主要来源于植物油脂，如大豆毛油中磷脂含量约为0.5-2％。但从加工工艺上来讲，植物油中磷脂的存在是不利的，会增加脱酸环节中性油的损失及脱色白土的用量，而且还容易引起加氢催化剂的中毒。精炼油中磷脂过高容易氧化影响产品色泽，此外其烟点低，烹调时易分解发烟。色拉油中磷脂含量应低于200ppm，一般在12.5-150ppm之间。

磷脂分析的方法较多。AOAC官方方法999.14对于膳食中磷脂的测定是基于样品碱法消化后，酶水解释放胆碱，然后比色测定胆碱的原理。该法的缺点是并非所有磷脂单体都含胆碱基团。总磷脂的测定是首先采用湿法酸消化，然后对磷元素采用Barlett arseno-molybdate法。问题是非磷脂磷会带来较大的误差。此外上述方法均准确度不高，而且操作繁琐、费时。采用色谱法(如HPLC)可对磷脂单体进行准确定量，但成本昂贵，检测限亦不高，而且复杂的样品富集前处理同样不可或缺。

Nzai等尝试了FT IR技术分析大豆油中的磷脂含量，发现相对于传统的湿法磷分析技术及TLC耦合密度扫描技术具有快速、简单、稳定的优点，但其背景如何扣除不清楚，方法的准确性和精确性均不高。Szydtowska-Czerniak在Nzai研究基础上引入偏最小平方和回归(partial least squares regression)模型定量对菜油中磷脂定量，准确度有所改善，但依然存在诸多问题如干扰物甘油三酯的浓度过高超出比尔定律范围、分离度不高，分析准确度低。为克服上述问题，Kuligowski等采用在线凝胶过滤色谱分离/ATR-FTIR色谱检测技术同时检测膳食成分中磷脂和大豆油含量，并采用一阶导数图谱增加峰拆分，取得了较好的效果。但由于衰减全反射色谱分辨率不高，该方法对磷脂的检测限仅为2mg/mL(2000ppm)。

此外，也有许多研究人员探讨采用FT-NIR技术分析人脑磷脂质组成、监测大豆油精炼过程中副产物和磷脂等。然而，要建立精确的定量模型，往往需要较大的样本容量，成本较高，而且也不适用于低磷脂含量的样品(＜1000ppm)。

(三)发明内容

本发明目的是提供一种基于溶剂萃取耦合FTIR快速分析磷脂的方法，该方法适合较低浓度磷脂含量(200ppm-5000ppm)样品的快速、自动化分析方法。

由于磷脂红外分析时最大误差来源于结构类似物甘油三酯的干扰，本发明采用溶剂萃取样品中的磷脂，其大部分中性甘油三酯等干扰物留在萃余相中，然后采用FTIR透射光谱分析萃取样品中磷脂含量。

本发明采用的技术方案是：

一种基于溶剂萃取耦合FTIR快速分析磷脂的方法，所述方法为：(1)将含200～5000ppm磷脂的油脂A用有机溶剂A萃取后，取上层萃取液A，在波谱范围4000～400cm^-1检测红外波谱，记为S_5；所述有机溶剂A为乙腈、DMSO、甲醇、乙醇中的一种或一种以上的混合；(2)另外取与油脂A相同的油脂B，油脂B经硅胶柱处理后获得脱胶油B，将脱胶油B用有机溶剂B萃取，取上层萃取液B，在波谱范围4000～400cm^-1检测红外波谱，记为S_4；所述有机溶剂B与有机溶剂A相同；(3)对S_4和S_5进行差谱分析，得到差谱S_6的二阶导数图谱S_7，读取二阶导数图谱S_7在4000～400cm^-1范围各特征峰的吸收强度，根据磷脂标准曲线获得油脂A中磷脂的浓度。

所述有机溶剂A、有机溶剂B为相同有机溶剂，均为乙腈和甲醇以体积比1∶0.25～9的混合液。

所述有机溶剂A、有机溶剂B均为乙腈与甲醇以体积比的1∶1.5混合液。

步骤(1)所述油脂A与有机溶剂A体积比为1∶0.5～12。

步骤(2)所述的硅胶柱处理为：200g经105℃活化2h的硅胶G(200～300目，青岛海洋化工有限公司)填充于3mm×400mm玻璃层析柱中，加入50～100g油脂B，真空吸附，收集流出液，得到的油脂B的脱胶油。