[发明专利]脱氮假单胞菌发酵生产维生素B12的培养基及发酵方法

权利要求书

1.一种脱氮假单胞菌发酵生产维生素B₁₂的培养基，包括一级种子培养基、二级种子培养基和发酵培养基，其特征在于上述一级种子培养基、二级种子培养基和发酵培养基中均含有人工糖蜜，该人工糖蜜是由麦芽糖、硫胺素、核黄素和生物素组成。

2.按照权利要求1所述的脱氮假单胞菌发酵生产维生素B₁₂的培养基，其特征在于上述一级种子培养基的组成为：麦芽糖2.0～2.2kg/m³，硫胺素0.007～0.008kg/m³，核黄素0.007～0.008 kg/m³，生物素0.007～0.008kg/m³，5, 6-二甲基苯并咪唑0.018～0.022 kg/m³，硫酸锌0.04～0.05 kg/m³，氧化镁0.018～0.022kg/m³，玉米浆14.0～16.0L/m³，磷酸氢二铵0.040～0.045 kg/m³，碳酸钙0.02～0.03 kg/m³和甜菜碱0.10～0.11 kg/m³。

3.按照权利要求1所述的脱氮假单胞菌发酵生产维生素B₁₂的培养基，其特征在于上述二级种子培养基的组成为：麦芽糖2.6～2.7kg/m³，硫胺素0.008～0.009kg/m³，核黄素0.008～0.009 kg/m³，生物素0.008～0.009kg/m³，5, 6-二甲基苯并咪唑0.07～0.08kg/m³，硫酸锌0.005～0.006kg/m³，氧化镁0.02～0.03kg/m³，玉米浆20.0～22.0L/m³，甜菜碱0.30～0.32kg/m³，磷酸氢二铵0.04～0.05kg/m³，碳酸钙0.08～0.09kg/m³和尿素0.004～0.005 kg/m³。

4.按照权利要求1所述的脱氮假单胞菌发酵生产维生素B₁₂的培养基，其特征在于上述发酵培养基的组成为：麦芽糖4.2～4.3kg/m³，硫胺素0.013～0.015kg/m³，核黄素0.013～0.015 kg/m³，生物素0.013～0.015 kg/m³，5, 6-二甲基苯并咪唑0.09～0.10kg/m³，甘油磷酸0.50～0.55kg/m³，硫酸锌0.005～0.006 kg/m³，氯化钴0.0001～0.0002kg/m³，玉米浆30.0～32.0L/m³，碳酸钙0.07～0.08kg/m³，尿素0.01～0.02kg/m³，磷酸氢二铵0.04～0.06 kg/m³，甜菜碱2.4～2.6kg/m³和氧化镁0.04～0.06kg/m³。

5.一种利用权利要求1至4任意一项培养基的发酵方法，其工艺步骤包括：

1）一级种子培养：首先将一级种子培养基灭菌，冷却，并用无菌空气保压，然后在火焰保护下，将已经培养好的脱氮假单胞菌母瓶种子接入其中进行培养，接种量控制在培养基体积的5－10％；

2）二级种子培养：先将二级种子培养基灭菌，冷却，并用无菌空气保压，然后将一级种子液全部移入二级种子罐进行培养。

3）发酵培养：先将发酵培养基灭菌，冷却，并用无菌空气保压，然后将二级种子液全部移入发酵罐进行培养。

6.按照权利要求5所述的发酵方法，其特征在于所述一级种子培养条件为：罐压0.04～0.05MPa；罐温29～33℃；空气流量3～8m³/h；培养时间20～30小时。