[发明专利]脱氮假单胞菌发酵生产维生素B12的培养基及发酵方法

说明书

技术领域

本发明属于发酵技术领域，特别是涉及一种脱氮假单胞菌发酵生产维生素B₁₂的培养基及发酵方法。

背景技术

维生素B₁₂为钴胺素类化合物，主要用于治疗恶性贫血，亦与叶酸合用用于治疗各种巨幼红细胞性贫血、抗叶酸药引起的贫血及脂肪泻。还用于神经系统疾病（如神经炎、神经萎缩）的治疗等。

目前国内外商品化的维生素B₁₂几乎都是通过微生物发酵进行生产的。其中以脱氮假单胞菌发酵生产维生素B₁₂的生产原辅料主要利用甜菜糖蜜、蔗糖等碳、氮源及少量无机盐组成的培养基进行液体深层发酵，中间采用流加补料方式，再经多步提炼、精制而成。甜菜糖蜜作为维生素B₁₂生产的主要原料，对维生素B₁₂的正常发酵生产起着重要作用。但是，一直以来，甜菜糖蜜由于受人工种植及采收季节的影响，产品质量波动大。甜菜糖蜜生产的季节性也特别强，每年的十月至次年的三月为甜菜糖蜜的产出季节，供应量较充足，糖蜜新鲜，质量较好，剩余的6个月时间甜菜糖蜜的产出量明显不足，这严重制约着维生素B₁₂的工业化生产；而且甜菜糖蜜因甜菜产地不同而质量差异较大，对维生素B₁₂的发酵单位影响较大；另外，糖蜜的贮存、运输成本也较高。

因此，提供一种可替代甜菜糖蜜的原料对于稳定维生素B₁₂工业化生产具有非常重要的意义。

发明内容

本发明的目的就在于克服上述现有技术的缺陷，提供一种可替代甜菜糖蜜，质量稳定，来源不受季节限制，供应充足，实现维生素B₁₂稳定、有效生产的脱氮假单胞菌发酵生产维生素B₁₂的培养基；

本发明的另一目的是提供利用上述培养基生产维生素B₁₂的发酵方法。

为实现上述目的所采取的技术方案为：

一种脱氮假单胞菌发酵生产维生素B₁₂的培养基，包括一级种子培养基、二级种子培养基和发酵培养基，其特征在于上述一级种子培养基、二级种子培养基和发酵培养基中均含有人工糖蜜，该人工糖蜜是由麦芽糖、硫胺素、核黄素和生物素组成；

上述一级种子培养基的组成为：麦芽糖2.0～2.2kg/m³，硫胺素0.007～0.008kg/m³，核黄素0.007～0.008 kg/m³，生物素0.007～0.008kg/m³，5, 6-二甲基苯并咪唑0.018～0.022 kg/m³，硫酸锌0.04～0.05 kg/m³，氧化镁0.018～0.022kg/m³，玉米浆14.0～16.0L/m³，磷酸氢二铵0.040～0.045 kg/m³，碳酸钙0.02～0.03 kg/m³和甜菜碱0.10～0.11 kg/m³；

上述二级种子培养基的组成为：麦芽糖2.6～2.7kg/m³，硫胺素0.008～0.009kg/m³，核黄素0.008～0.009 kg/m³，生物素0.008～0.009kg/m³，5, 6-二甲基苯并咪唑0.07～0.08kg/m³，硫酸锌0.005～0.006kg/m³，氧化镁0.02～0.03kg/m³，玉米浆20.0～22.0L/m³，甜菜碱0.30～0.32kg/m³，磷酸氢二铵0.04～0.05kg/m³，碳酸钙0.08～0.09kg/m³和尿素0.004～0.005 kg/m³；