[发明专利]具有抑菌作用的茶树菇发酵液的制备方法

权利要求书

1.一种具有抑菌作用的茶树菇发酵液，其特征在于外观为淡黄色液体，是茶树菇通过深层发酵获得的发酵液经过浓缩，脱蛋白，透析，滤过除菌后制得。其中发酵液所含氨基酸中谷氨酸占18％以上，天冬氨酸占12％以上，甘氨酸占8％以上，赖氨酸占7％以上，丙氨酸占6％以上，然后通过滤纸片法进行抑菌活性实验，结果表明其对常见致病菌，尤其是肠道致病菌有一定抑制作用。

2.权利要求1所述的发酵液的制备方法。该方法由下列步骤组成：

(1)菌种培养

出发菌种为市售茶树菇(Agrocybe aegirit)；

①组织分离法

斜面培养基：PDA培养基，含1.5％～2.0％琼脂，pH自然；

组织分离方法：将子实体外表用酒精进行表面消毒后，放入超净工作台上，用消毒过的刀片与镊子切取菌柄与菌盖交界处组织块接入斜面培养基上，pH自然，置于25℃温度下暗培养，5d后菌丝开始萌发，每隔2d检查1次，除去污染，选择菌丝生长速度快和长势强的试管作为纯母种；

②摇瓶种子培养

摇瓶种子培养基：PDA1L加磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.5g，牛肉膏2g，蛋白胨1g，pH6.0；

培养方法：从斜面菌种中取3～4块黄豆大小相同的菌块，接种于摇瓶种子培养基中，250mL三角瓶装培养基100mL于25℃，150r/min，振荡培养7d；

③摇瓶发酵培养

发酵培养基：玉米粉2g/100mL、酵母粉0.3g/100mL、磷酸二氢钾0.2g/100mL、硫酸镁0.05g/100mL；

培养方法：将培养好的种子以15％的接种量接入摇瓶发酵培养基中25℃，150r/min，振荡培养7d；

(2)发酵液浓缩，脱蛋白，透析

培养后离心，取上清液旋转蒸发仪浓缩后用Sevage法去除游离蛋白，然后取上清液透析。

(3)滤过除菌

上述液体通过0.22μm的滤膜除菌。

3.如权利要求1所述的抑菌实验所用滤纸片的制备方法，其特征在于用打孔器将新华1号定性滤纸打成直径6mm的小圆片，于培养皿中121℃湿热灭菌30min，将灭菌滤纸片浸入茶树菇发酵液中，浸泡24h后取出。

4.如权利要求1所述的抑菌实验菌种包括金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌、枯草芽胞杆菌、伤寒杆菌、面包酵母、黑根霉、曲霉。

5.如权利要求2所述的发酵液的制备方法，其特征在于所述用Sevage法去除游离蛋白，是按发酵液1/5的体积加入氯仿，然后加入氯仿体积1/5的正丁醇，混合后振荡20min。蛋白质与氯仿-正丁醇生成凝胶，4000rpm离心20min，收集上清液，反复操作8次至氯仿-正丁醇层不浑浊为止。

6.如权利要求2所述的发酵液的制备方法，其特征在于所述的透析是指将去除游离蛋白质的发酵液装入透析袋中，扎紧袋口，悬浮于蒸馏水中，透析48h，中间每隔12小时换水一次。