[发明专利]抗HIV的药物靶点及其在制药中的用途

说明书

技术领域

本发明公开了一种抗HIV的药物靶点，同时还提供了该药物靶点在制药中的用途，属于生物制药技术领域。

背景技术

治疗艾滋病的药物目前临床上市的药物根据药物作用靶点可分为以下几类：病毒的吸附融合、逆转录酶、整合酶、蛋白酶已成为筛选和制备抗AIDS药物的主要靶点，近十多年来的研制以及临床治疗主要是针对这几个位点进行的。令人遗憾的是，虽然这些药物可以抑制相应病毒蛋白的活性，但是在临床治疗中都存在种种不利因素如：用药周期持久、长期使用后出现耐药性、毒副作用、病患难以忍受疼痛、停药后的病毒重活化（reactivation）、药价昂贵、检测技术和设备有限等。这些问题使通常使用的抗艾滋病药物在治疗过程中会受到不同程度的制约，而无法广泛的应用。

对于HIV药物的诸多缺陷，耐药性是主要问题之一，即病毒可发生多次氨基酸突变而产生交叉耐药导致抗病毒治疗失败。1996年，科研人员对此提出了“鸡尾酒疗法”（HAART，高效抗逆转录疗法）的策略，即采用三种联合用药的方式治疗AIDS。这种方法可以同时抑制HIV复制过程的多个环节，最大限度的降低耐药性，降低HIV感染者发生AIDS的发病率和死亡率，在极大程度上改善了患者的预后生活质量。虽然数年的临床治疗后发现这种方法也存在一些不足如：药物之间的相互作用、毒性的相加、产生HIV交叉抗药性、用药剂量大而且复杂、药物对潜伏HIV无效等，但是HAART方法无疑是目前为止最为有效的AIDS治疗手段，因此很多研究者已经开始着手解决其使用中存在的局限性。以长远的战略性眼光来看，最好的解决途径就是彻底了解HIV-1病毒学特性和免疫机理，加速新型药物及靶标的研制与开发，增添鸡尾酒疗法的配方，这也是未来艾滋病治疗研究的一个主要方向与手段。

APOBEC3G蛋白是最新被发现的人体细胞内天然抗病毒因子，但是其抗病毒功能却被HIV-1 Vif蛋白所拮抗。Vif能够与宿主细胞内多种蛋白形成一个具有泛素蛋白连接酶功能的ECS复合物，导致APOBEC3G的泛素化并最终被体内蛋白酶体识别、降解，从而无法发挥抗病毒功能。探讨Vif蛋白的作用机理对于设计抗艾滋病药物具有重要的研究意义。

发明内容

本发明公开了一种抗HIV的药物靶点，利用该靶点设计筛选出新的治疗HIV的药物。

本发明还提供了该药物靶点在制药中的用途，该药物靶点的单克隆抗体和多克隆抗体及其制备方法以及潜在的新型病毒抑制剂。

本发明的技术解决方案如下：

通过分子克隆手段删除了CBFβ的Helix4和Loop3，以及Vif的N端，或者是突变了Vif的第21位或Vif的第38位以及Vif第145、146及147位的氨基酸位点，通过免疫共沉淀方法检测CBFβ和Vif结合能力明显下降。

上述的HIV病毒药物靶点的另一种优选方式为，通过分子克隆手段删除了CBFβ的Helix4和Loop3，以及Vif的N端，或者是突变了Vif第21位氨基酸或Vif第38位以及Vif第145、146及147位的氨基酸位点， HIV-1Vif降解APOBEC3G的能力下降。

本发明提供的HIV药物靶点，其特征在于：

该药物靶点针对病毒的Vif蛋白与宿主细胞CBFβ蛋白之间的相互结合位点；该结合位点包括CBFβ的Helix4和Loop3，以及Vif的N端。

所述的HIV病毒药物靶点，优选位点是Vif第21位氨基酸或Vif第38位氨基酸。

本发明提供一种抗HIV-1病毒的多克隆抗体，其特征在于是以Vif N端前98个氨基酸范围内的多肽为抗原表位的多克隆抗体，具有抑制HIV-1 Vif和CBFβ结合的能力。

所述抗HIV-1病毒的多克隆抗体的制备方法，步骤包括：

1）提供序列在Vif  N端前98个氨基酸范围内的多肽或序列以SLQ位点为抗原表位的多肽；

2）将多肽与载体蛋白偶联，并与佐剂一起免疫动物；

3）取动物的抗血清，经过抗原偶联的亲和层析柱纯化，即得所述多克隆抗体。

上述的这些抗体制备步骤并不是一成不变的，本领域的普通技术人员可以根据实际情况进行合理的修改使之符合应用要求。比如是否采用与载体蛋白偶联，是否用亲和层析方法纯化等等。

本发明提供一种抗HIV-1病毒的单克隆抗体，其特征在于是以Vif N端前97个氨基酸范围内的多肽为抗原表位的单克隆抗体，具有抑制HIV-1 Vif和CBFβ结合的能力。

所述抗HIV-1病毒的单克隆抗体的制备方法，步骤包括：