[发明专利]高密度微生物混合发酵在氮限制下合成含苯聚羟基烷酸酯的方法

权利要求书

1.一种高密度微生物混合发酵在氮限制下合成含苯聚羟基烷酸酯的方法，其特征在于：合成方法为：

(1)第一阶段：首先在发酵培养基中加入不大于0.5g/L的含苯有机物和5～20g/L的糖作为碳源，然后接入两种或两种以上的微生物种子液于发酵培养基中，并在发酵罐中进行发酵培养，以1vvm的流量将无菌空气或富氧气体连续通入搅拌釜式发酵罐内，控制发酵罐的搅拌转速为150～800转/分钟，发酵温度为微生物生长的适宜温度，发酵液中溶解氧浓度高于微生物生长代谢的需求值；并利用氨水调节pH为微生物生长的适宜pH值；发酵过程中利用在线信号判断发酵过程中碳源的消耗量，适时流加碳源以保证微生物的生长所需碳源；

(2)第二阶段：当微生物细胞吸光密度达到30后，利用不含氮的碱性溶液来调节pH值，并停止补加氨水和其它含氮物质，使发酵液中的氮含量逐渐降低至0.001mol/L，造成发酵液中氮源供给不足实现氮限制；并随时监控溶解氧浓度和pH值的变化，当二者的值同时迅速上升时，流加碳源，微生物就会将发酵液中的碳源通过微生物代谢合成转化为含苯聚羟基烷酸酯。

2.根据权利要求1所述的高密度微生物混合发酵在氮限制下合成含苯聚羟基烷酸酯的方法，其特征在于：所述的两种或两种以上的微生物为Pseudomonas oleovorans，Pseudomonas putida，Pseudomonas hydrogenovora，Caldimonas taiwanensi，Ralstonia eutropha中的两种或两种以上。

3.根据权利要求1所述的高密度微生物混合发酵在氮限制下合成含苯聚羟基烷酸酯的方法，其特征在于：所述的含苯有机物为苯乙酸、苯己酸、苯戊酸、苯乳酸中的一种或一种以上的混合物。

4.根据权利要求1所述的高密度微生物混合发酵在氮限制下合成含苯聚羟基烷酸酯的方法，其特征在于：所述的糖为葡萄糖、蔗糖、木糖中的一种或一种以上。

5.根据权利要求1所述的高密度微生物混合发酵在氮限制下合成含苯聚羟基烷酸酯的方法，其特征在于：第一阶段中所述的适宜温度为28～38℃，适宜pH值为7.0±2。

6.根据权利要求1所述的高密度微生物混合发酵在氮限制下合成含苯聚羟基烷酸酯的方法，其特征在于：所述的发酵培养基为组成如下的培养基：蔗糖15g/L，KH₂PO₄ 3g/L，(NH₄)₂SO₄ 1g/L，MgSO₄·7H₂O 1.2g/L，柠檬酸1.7g/L，苯戊酸0.1g/L，微量元素溶液10ml/L。

7.根据权利要求6所述的高密度微生物混合发酵在磷限制下合成含苯聚羟基烷酸酯的方法，其特征在于：所述的微量元素溶液，其组成如下：FeSO₄·7H₂O 10g/L，CaCl₂ 2g/L，ZnSO₄·7H₂O  2.25g/L，MnSO₄·4H₂O  0.35g/L，CuSO₄·5H₂O  1.2g/L，H₃BO₃ 0.25g/L，Na₂MoO₄·2H₂O  0.12g/L，35％HCl  10ml/L。