[发明专利]Tip60的pSer86单克隆抗体与制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种新的细胞株和单克隆抗体，尤其是涉及一种能产生Tip60第86位丝氨酸磷酸化的单克隆抗体细胞株和抗Tip60第86位丝氨酸磷酸化(pSer86)的单克隆抗体的制备方法和应用。

背景技术

Tip60(Tat Interactive Protein，60KDa)是目前研究最为透彻的MYST家族中的一种组蛋白乙酰基转移酶(Histone Acetyltrsferease，HAT)，主要存在于由至少18亚基组成的稳定核蛋白稳定复合物中。Tip60除了乙酰化组蛋白H2A，H3，H4之外，还能修饰一系列非组蛋白，例如髓细胞组织增生癌基因c(c-Myc)、激酶ATM、E2F转录因子等。然而在某些情况下，Tip60也会抑制转录活性。现已证明Tip60蛋白参与了细胞信号、基因表达调控、染色质重建、DNA损伤修复、细胞凋亡和肿瘤发生等活动。已有的研究证实了Tip60在Ser86和Ser90发生磷酸化时，其HAT活性也随之增强。因HAT活性是DNA损伤应答、β-淀粉样前体切割等过程所必需的，表明磷酸化的Tip60在这些过程中发挥重要作用，因此Tip60及其磷酸化形式已成为当前分子细胞生物学研究的热点之一。但是目前国内外市场上缺乏可用于研究内源性磷酸化的Tip60抗体，而无法开展相关的研究。有关参考文献见：[1]C.Charvet et al.，Phosphorylation of TIP60 by GSK-3 Determines the Induction of PUMA and Apoptosis by p53.Mol.Cell 42，584-596(2011)；[2]C.Lemercier et al.，TIP60 acetyltransferase activity is controlled by phosphorylation.J.Biol.Chem.278，4713-4718(2003)；[3]Kamine J，Elangovan B，Subramanian T，Coleman D，Chinnadurai G.Identification of a cellular protein that specifically interacts with the essential cysteine region of the HIV-1Tat transactivator.Virology.1996Feb 15；216(2)：357-66。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能产生Tip60第86位丝氨酸磷酸化的单克隆抗体细胞株及其制备方法。

本发明的另一目的在于提供一种效价高、特异性强、应用范围广的Tip60第86位丝氨酸磷酸化的单克隆抗体及其制备方法和应用。

所述Tip60第86位丝氨酸磷酸化的单克隆抗体细胞株pSer86-13MAb已于2011年06月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏中心登记入册编号为CGMCC No.4940。

所述Tip60第86位丝氨酸磷酸化的单克隆抗体是由Tip60第86位丝氨酸磷酸化的单克隆抗体细胞株pSer86-13MAb产生的抗体。

所述Tip60第86位丝氨酸磷酸化的单克隆抗体细胞株的制备方法包括以下步骤：

1)设计1条Tip60第86位丝氨酸磷酸化的多肽序列，将所述多肽序列与血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyamin，简称KLH)进行偶联形成一个多肽偶联蛋白，作为人工免疫原；

所述Tip60第86位丝氨酸磷酸化的多肽序列为：KTPTKNGLPGSRPG，其中Ser磷酸化修饰；

2)利用步骤1)所得人工免疫原对Bal b/C小鼠进行3～6次动物免疫后用酶联免疫吸附测定法(Enzyme Linked Immunosorbent Assay，ELISA)检测小鼠血清免疫效价；

3)从血清免疫效价最好的小鼠身上获得脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP 2/0进行细胞融合，用酶联免疫吸附测定法经过2～6轮反复筛选杂交瘤细胞，最终获得能稳定分泌的Tip60第86位丝氨酸磷酸化的单克隆抗体细胞株，所述Tip60第86位丝氨酸磷酸化的单克隆抗体细胞株也是Tip60第86位丝氨酸磷酸化的单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

所述Tip60第86位丝氨酸磷酸化的单克隆抗体的制备方法包括以下步骤：