[发明专利]黄杆菌属菌株与内切褐藻胶裂解酶编码基因及制备与应用

权利要求书

1.黄杆菌属的菌株，其为黄杆菌S20，分类命名：黄杆菌Flavobacterium sp.，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号：CGMCC NO.5026，保藏日期2011年07月05日。

2.一种来源于权利要求1所述菌株(Flavobacterium sp.S20)的内切褐藻胶裂解酶基因Alg2A，其核苷酸序列具有如下特征之一：

1)具有序列表中SEQ ID NO.1的脱氧核糖核酸(DNA)序列；

2)编码SEQ ID NO.2氨基酸序列的脱氧核糖核酸(DNA)序列；

3)具有与序列表中SEQ ID NO.1所限定的脱氧核糖核酸(DNA)序列的同源性达到80％及以上，且能编码降解褐藻酸盐的蛋白质的脱氧核糖核酸(DNA)序列。

3.按照权利要求2所述的内切褐藻胶裂解酶基因编码的内切褐藻胶裂解酶，其编码的氨基酸序列具有如下特征之一：

1)序列表中SEQ ID NO.2从氨基端开始的第1-288或第23-288位氨基酸残基序列；

2)将序列表中的SEQ ID NO.2从氨基端开始的第1-288或23-288位氨基酸残基序列经过氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加后，具有降解褐藻酸盐活性的蛋白质；

3)与序列表中SEQ ID NO.2所限定的氨基酸序列的同源性达到80％及以上且具有降解褐藻酸盐活性的蛋白质。

4.一种制备如权利要求3所述的内切褐藻胶裂解酶的方法，其特征在于：是将权利要求2所述的内切褐藻胶裂解酶基因克隆入重组表达载体，导入宿主细胞，获得重组表达的内切褐藻胶裂解酶；

所述的重组表达内切褐藻胶裂解酶的表达载体，是指大肠杆菌表达载体、酵母表达载体、枯草杆菌表达载体、乳酸菌表达载体、链霉菌表达载体、噬菌体载体、丝状真菌表达载体、植物表达载体、昆虫表达载体、或哺乳动物细胞表达载体。

5.按照权利要求4所述的方法，其特征在于：用于重组表达内切褐藻胶裂解酶的重组菌或转基因细胞系，是指大肠杆菌宿主细胞、酵母菌宿主细胞、枯草杆菌宿主细胞、乳酸菌宿主细胞、放线菌宿主细胞、丝状真菌宿主细胞、昆虫细胞，哺乳动物细胞中的一种。

6.一种如权利要求3所述的内切褐藻胶裂解酶在褐藻酸盐降解中的应用，其特征在于：具有如下用途之一或二种以上；

1)用于断裂褐藻酸盐或褐藻多糖的糖苷键，获得褐藻酸盐寡糖；

2)用于降解红藻、或褐藻细胞壁中的褐藻酸盐组分，抽提原生质体，原生质体可用于食品及藻类研究；

或3)用于破坏致病菌铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)所形成的菌膜中褐藻酸钠成分，可用于治疗铜绿假单胞菌引起的肺囊肿性纤维化症或其他感染。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于：所述内切褐藻胶裂解酶Alg2A与其他褐藻胶降解酶混合后，用于协同断裂褐藻酸盐糖苷键方面的应用。