[发明专利]EB 病毒 Zta IgA 抗体胶体金检测试剂盒及其制备方法

说明书

【技术领域】

本发明涉及一种抗体检测试剂盒，具体涉及一种检测EB病毒Zta IgA抗体的胶体金检测试剂盒及其制备方法，属于医药生物技术领域。 

【背景技术】

EB病毒(Epstein-barr virus，EBV)是一种嗜人类B淋巴细胞的γ疱疹病毒，主要侵犯B淋巴细胞，对人的B淋巴细胞、上皮细胞(包括腮腺管、咽以及宫颈等)和腺细胞有亲和力。1997年世界卫生组织的国际抗癌联盟年会上把EBV归类为第一类致癌物。Zta蛋白是由立即早期基因BZLF1表达的EB病毒早期激活因子，是由潜伏性感染转化为溶解性感染立即早期时相的产物，是EB病毒进入裂解复制状态必需的激活元件，在病毒从潜伏感染转变为溶解感染，以及溶解性感染期病毒基因组的转录和表达等过程中扮演重要角色。立即早期蛋白Zta在EB病毒癌变过程中所起的作用，近几年越来越受到研究者的关注。目前的研究发现EB病毒感染与多种人类肿瘤如鼻咽癌、淋巴癌等相关。 

现有检测EB病毒的方法主要有： 

Real-time定量PCR法 

此法主要用于EB病毒DNA的定量。用荧光定量PCR方法检测鼻咽癌(NPC)患者的血浆中EB病毒DNA，检出率达96％，并在随后的研究中证实放疗后肿瘤消退的患者血浆中EB病毒DNA也迅速下降。 采用Real-time定量PCR技术，利用一对特异性引物和特异性荧光探针，结合PCR技术和荧光检测技术，实现对EB病毒的定量检测。但在早期诊断中灵敏度低，特异性与FA IgA相似。 

间接免疫荧光/免疫酶法 

传统上，用含病毒淋巴细胞涂片的间接免疫荧光法检测EB病毒特异性抗体，目前国外还在使用，主要是检测VCA IgA抗体和FA IgA抗体，需使用荧光显微镜。中国自80年代起，推广使用了免疫酶法(EIA法)检测VCA IgA抗体和FA IgA抗体，然而，该法存在批间质量差异较大，肉眼观察欠缺客观性，指标较粗等缺点，目前已逐步被酶联免疫法取代。 

酶联免疫法(ELISA) 

酶联免疫法(ELISA)检测血清或血浆中各类抗体，采用基因重组的EB病毒复制周期不同阶段表达的抗原。国内应用得最为广泛的是EB病毒溶解性感染B淋巴细胞，增殖开始时所产生的EB病毒早期抗原FA，以及增殖后期合成的EB病毒壳抗原VCA。但ELISA法操作复杂，检测时间长，需要对待测样品进行稀释、温育、分离、洗涤和显色等操作。 

【发明内容】

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供了一种EB病毒ZtaIgA抗体胶体金检测试剂盒，选用的是EB病毒特异性抗原早期激活因子Zta即重组EB病毒zta抗原作为检测线包被抗原，适用于定性检测人血清中的EB病毒Zta IgA抗体。本试剂盒既可用于EB病毒感 染相关的鼻咽癌的辅助诊断，也可用于高危人群的筛选和风险评估，为疾病及早发现及早治疗提供可能。 

本发明还提供了一种制备EB病毒Zta IgA抗体胶体金检测试剂盒的方法。 

本发明的技术方案为： 

一种EB病毒Zta IgA抗体胶体金检测试剂盒，包括底板，所述底板上粘贴有带有检测线(T线)和质控线(C线)的反应膜，所述反应膜靠近检测线的一端依次叠加粘贴有金标垫，样品垫，所述反应膜靠近质控线的一端叠加粘贴有吸收垫，其特征在于：所述反应膜上检测线包被了重组EB病毒Zta抗原，所述反应膜上质控线包被了羊抗鼠IgG抗体，所述金标垫上包被了胶体金标记的鼠抗人IgA单克隆抗体。 

如上所述的EB病毒Zta IgA抗体胶体金检测试剂盒，其特征在于 

所述重组EB病毒Zta抗原的包被浓度为1.2mg/ml，所述重组EB病毒Zta抗原为无色透明液体，浓度大于2mg/ml，用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGA)测定，上样量在10μl条件下仅存一条带； 

所述羊抗鼠IgG抗体的包被浓度为2.0mg/ml； 

所述鼠抗人IgA单克隆抗体的标记浓度为30μg/ml，所述鼠抗人IgA单抗为无色透明液体，浓度大于2mg/ml，用SDS PAGA测定，上样量在10μl条件下存两条带。 

如上所述的EB病毒Zta IgA抗体胶体金检测试剂盒，其特征在于所述底板为聚氯乙稀板(PVC板)。 

如上所述的EB病毒Zta IgA抗体胶体金检测试剂盒，其特征在于所述反应膜为硝酸纤维素膜(NC膜)。 

一种如上所述的EB病毒Zta IgA抗体胶体金检测试剂盒的制备方法，其特征在于包括以下步骤：