[发明专利]高效诱导桉树离体茎段不定芽再生的方法

权利要求书

1. 一种高效诱导桉树离体茎段不定芽再生的方法，其特征在于，包括如下步骤：

培养无菌外植体步骤，以2-4年生桉树杂交品种的带腋芽茎段为培养原材料，依次进行消毒子步骤、腋芽萌发培养子步骤、丛生芽培养子步骤、生根苗培养子步骤及白化苗培养子步骤，获得白化苗作为无菌外植体；

愈伤组织的诱导步骤，将无菌外植体切段成合适的长度，接种到含0.05-2.0mg/L N-(2-氯-4-吡啶基)-N-苯基脲、0.01-0.1mg/L萘乙酸、10-500mg/L腐胺和1-50mg/L亚精胺的B5培养基上进行愈伤诱导，先暗培养5-15天，再弱光照培养5-20天，形成愈伤组织；

芽诱导培养分化不定芽步骤，将愈伤组织转移到芽诱导分化培养基上培养，且每隔14-25天转移到成分相同的芽诱导分化培养基上继代培养14-100天，使愈伤组织分化不定芽，所述芽诱导分化培养基是含有10-40mg/L腐胺，0.5-3.0mg/L亚精胺的B5培养基。

2. 根据权利要求1所述的高效诱导桉树离体茎段不定芽再生的方法，其特征在于：培养无菌外植体步骤中，所述消毒处理是采用酒精和升汞对培养原材料进行泡洗消毒，并用无菌水冲洗。

3. 根据权利要求1所述的高效诱导桉树离体茎段不定芽再生的方法，其特征在于：腋芽萌发培养子步骤中，采用的培养基是MS培养基，培养条件是：温度22-30℃，无光照。

4. 根据权利要求1所述的高效诱导桉树离体茎段不定芽再生的方法，其特征在于：丛生芽培养子步骤中，采用的培养基是含0.1-2.0mg/L细胞分裂素和0.01-1.0mg/L生长素的MS培养基，培养条件是：诱导培养21-28天，光照12-18小时/天，光照强度1500-10000lx，温度22-30℃。

5. 根据权利要求1所述的高效诱导桉树离体茎段不定芽再生的方法，其特征在于：生根苗培养子步骤中，采用的培养基是含0.1-1.0mg/L生长素的1/2MS培养基，生根诱导培养的条件是，诱导培养15-30天，光照12-18小时/天，光照强度1500-10000lx，温度22-30℃。

6. 根据权利要求5所述的高效诱导桉树离体茎段不定芽再生的方法，其特征在于：所述生长素为3-吲哚丁酸。

7. 根据权利要求1所述的高效诱导桉树离体茎段不定芽再生的方法，其特征在于：白化苗培养子步骤中，采用的培养基是含蔗糖30-100g/L的B5培养基，培养条件是：暗培养14-35天，温度22-30℃。

8. 根据权利要求1所述的高效诱导桉树离体茎段不定芽再生的方法，其特征在于：愈伤组织的诱导步骤中，外植体的切段长度为2-10mm，培养时温度22-30℃；弱光照培养时，光照12-18小时/天，光照强度20-200lx，22-30℃。

9. 根据权利要求1所述的高效诱导桉树离体茎段不定芽再生的方法，其特征在于：芽诱导培养分化不定芽步骤中，所述芽诱导分化培养基还含有0.2-2.0mg/L细胞分裂素，0.05-0.5mg/L生长素，培养条件是：光照12-18小时/天，光照强度500-3000lx，温度22-30℃。

10. 根据权利要求4或9所述的高效诱导桉树离体茎段不定芽再生的方法，其特征在于：所述细胞分裂素为6-苄基嘌呤，所述生长素为萘乙酸。