[发明专利]麻疯树遗传转化苗的复壮及生根的培养方法

权利要求书

1. 一种麻疯树遗传转化苗的复壮及生根的培养方法，其特征在于，步骤如下：

准备步骤，选用合适的外植体由根癌农杆菌浸染处理后，再经抗性愈伤诱导及分化培养基培养后获得再生芽作为抗性芽备用；

壮苗培养步骤，将抗性芽从抗性愈伤组织上切取下来，切去褐化部位，转接到壮苗培养基P中进行壮苗培养；

生根培养步骤，挑取经过壮苗培养后高2-3厘米并有4-6片叶的抗性芽，切除基部愈伤组织，用10-20mg/L的生根粉溶液浸泡8~15分钟，转接至生根培养基R中进行生根培养，直至生根苗达到出罐炼苗的技术要求；

炼苗步骤，对达到出罐炼苗的技术要求的生根苗开盖炼苗，移栽至温室。

2. 根据权利要求1所述的麻疯树遗传转化苗的复壮及生根的培养方法，其特征在于：准备步骤中选用的外植体为带有4-6片真叶的茎段，其长度为2-3cm。

3. 根据权利要求1所述的麻疯树遗传转化苗的复壮及生根的培养方法，其特征在于：所述准备步骤中使用的根癌农杆菌是如下携带含有目的基因载体的根癌农杆菌菌株中的任意一种：EHA105、LBA4404、GV3101、MP90。

4. 根据权利要求1所述的麻疯树遗传转化苗的复壮及生根的培养方法，其特征在于：所述准备步骤中使用的抗性愈伤诱导及分化培养基含有1-3 mg/L草胺膦或20-50 mg/L卡那霉素或1-10 mg/L潮霉素。

5. 根据权利要求1所述的麻疯树遗传转化苗的复壮及生根的培养方法，其特征在于：壮苗培养基P的配方为：MS基本培养基+10-30g/L蔗糖+0.2-1.5 mg/L 6-苄氨基嘌呤+0.005-0.1 mg/L吲哚丁酸+1-5 mg/L硝酸银+50-300 mL/L椰汁+5-10 g/L琼脂+1-3 mg/L草胺膦或20-50mg/L卡那霉素或1-10mg/L潮霉素+50-150 mg/L特美汀，pH=5.6-6.0。

6. 根据权利要求1或5所述的麻疯树遗传转化苗的复壮及生根的培养方法，其特征在于：壮苗培养的培养条件是：温度24-28℃，光照强度1000-2000 lx，光照时间12-18小时/天，培养时间为3-5周，每两周继代一次。

7. 根据权利要求1所述的麻疯树遗传转化苗的复壮及生根的培养方法，其特征在于：生根培养基R配方为：1/2MS基本培养基+ 0.01-0.1 mg/L吲哚-3-乙酸+ 0.01-0.1 mg/L萘乙酸+ 0.05-0.25 mg/L吲哚丁酸+ 10-15 g/L蔗糖+ 4-8 g/L琼脂+ 1-3 mg/L草胺膦或20-50 mg/L卡那霉素或1-10 mg/L潮霉素+ 50-150 mg/L特美汀。

8. 根据权利要求1或7所述的麻疯树遗传转化苗的复壮及生根的培养方法，其特征在于：生根培养步骤中，培养条件是：温度24-28℃，光照强度1000-2000 lx，光照时间12-18小时/天，每两周继代一次。

9. 根据权利要求1所述的麻疯树遗传转化苗的复壮及生根的培养方法，其特征在于：抗性芽在生根培养基R中培养7-10天开始生根，25-35天左右达到出罐炼苗的技术要求。

10. 根据权利要求1或9所述的麻疯树遗传转化苗的复壮及生根的培养方法，其特征在于：生根苗的根长为3-5 cm即可进行炼苗。