[发明专利]一种鸡IL-18与新城疫病毒HN基因重组融合蛋白及应用

权利要求书

1.一种chIL-18-HN融合蛋白，其特征在于：主要由鸡白细胞介素18(chIL-18)的氨基酸序列，新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶(HN蛋白)的氨基酸序列，以及位于chIL-18氨基酸序列和新城疫病毒HN蛋白的氨基酸序列之间的柔性Linker肽氨基酸序列组成；由鸡白细胞介素18(chIL-18)基因和鸡新城疫病毒HN基因通过柔性Linker肽串联连接而成。

2.根据权利要求1所述的chIL-18-HN融合蛋白，其特征在于：该蛋白具有SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列。

3.根据权利要求1所述的chIL-18-HN融合蛋白，其特征在于：所述的柔性Linker肽具有SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列。

4.一种分离的DNA序列，其特征在于：编码具有序列为SEQ ID NO.7的氨基酸序列的融合蛋白。

5.根据权利要求4所述的DNA序列，其特征在于：具有SEQ ID NO.5的核苷酸序列。

6.一种重组毕赤酵母载体，其特征在于：它含有SEQ ID NO.5的DNA序列。

7.一种重组毕赤酵母菌，其特征在于：它含有SEQ ID NO.5的DNA序列。

8.一种重组融合蛋白的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)获得编码chIL-18-HN融合蛋白的基因序列；

(2)将步骤(1)获得的chIL-18-HN融合蛋白的基因序列，插入到毕赤酵母载体pPICZαA中，得到重组表达的毕赤酵母载体，命名为pPICZαA-chIL-18-HN；

(3)将步骤(2)获得的重组表达的毕赤酵母载体pPICZαA-chIL-18-HN，电击转化入毕赤酵母菌X-33感受态细胞中，高抗性筛选和PCR鉴定，获得表达重组融合蛋白的基因毕赤酵母X-33菌株；

(4)将步骤(3)获得的表达重组融合蛋白的基因工程酵母X-33菌株，培养，分离培养液上清，获得重组融合蛋白。

9.根据权利要求8所述的重组融合蛋白的制备方法，其特征在于：步骤(4)中的培养条件为：在pH6.0的BMMY培养液中30℃、250r/min下振荡培养，甲醇诱导浓度1.5％、诱导时间120h，期间每24h补加终浓度为1.5％的甲醇。

10.一种如权利要求8所获得的重组融合蛋白在制备鸡新城疫预防和治疗药物中的应用。