[发明专利]鸭BYD病毒灭活疫苗及其制备方法

权利要求书

1.鸭BYD病毒(Family Flaviviridae，Genus Flavivirus，Ntaya virus group，Duck BYD virus)JXSP株，其保藏编号为CGMCC No.5266。

2.权利要求1所述的鸭BYD病毒JXSP株在制备预防BYD病毒感染引起的鸭产蛋下降综合征疫苗中的应用。

3.含有权利要求1所述的鸭BYD病毒JXSP株的疫苗。

4.一种制备权利要求1所述的鸭BYD病毒JXSP株病毒液的方法，包括如下步骤：

1)将扩大培养的细胞按培养液体积的1％加入权利要求1所述的JXSP株病毒种子，37℃，吸附1小时；

2)加入1％胎牛血清维持液，37℃下培养，当细胞病变达75％以上时收获，冻融3次；

3)离心或过滤除去细胞碎片，收集上清液，该上清液即为鸭BYD病毒JXSP株病毒液。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的细胞为BHK-21、Vero和/或鸭胚成纤维细胞。

6.一种制备鸭BYD病毒灭活疫苗的方法，是将权利要求4所述方法制备的鸭BYD病毒JXSP株病毒液作为制苗用病毒液依次进行灭活和乳化，得到鸭BYD病毒灭活疫苗。

7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述病毒液病毒含量≥10^5.5TCID₅₀/mL。

8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述的灭活是将病毒液按终浓度为0.2％体积比加入甲醛溶液，混匀，37℃作用24h。

9.如权利要求6-8任一所述的制备方法，所述的乳化是以灭活后的病毒液作为水相，按照水相油相体积比4∶6混合后，10000～12000r/min乳化2min，终止搅拌前加入硫柳汞溶液，使终浓度达到0.01％体积比。

10.如权利要求9所述的制备方法，其特征在于，取注射用白油94mL，加硬脂酸铝2g，边加边搅拌，直至完全透明，再加入6mL司本-80，充分混匀，高压灭菌得到100mL油相；取灭活的细胞培养病毒液100mL加入4mL灭菌的吐温-80，充分摇动直到吐温-80完全溶解，得到104mL水相。