[发明专利]鸭BYD病毒灭活疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及兽医生物制品技术领域，具体地，涉及鸭BYD病毒疫苗及其制备方法。

背景技术

从2010年4月以来，中国东南部分省份的鸭场流行一种严重的疾病，该疾病迅速蔓延至中国各主要养鸭重省市，包括浙江、福建、江西、山东、河北、江苏和北京。疾病影响包括北京鸭和麻鸭在内的多种产蛋鸭，感染鸭呈现出最突出的临床症状就是采食量忽然下降伴随产蛋率的骤降，产蛋率在5天内可降至10％，剖检可见卵巢发生出血、萎缩、破裂等严重病变。初期可见部分卵泡有出血点或出血斑，随着病程的发展，卵泡严重的出血和变性，卵泡破裂和腹膜炎，部分病例可见有脾脏肿大。组织病变主要表现为卵巢出血、卵泡发育停止、闭锁或崩解，可见大量大小不等的圆形或颗粒状红染小体，充满已崩解的卵泡或间质。个别病例脑可见小胶质细胞浸润灶，脑蛛网膜下充血、炎性细胞浸润。在一些感染严重的鸭场种蛋几乎绝产，发病后期种鸭死亡率为5％-30％不等，给养鸭业造成了巨大的经济损失。

经系统的流行病学调查和病原分离鉴定，研究证实了该疾病的元凶是一种新的黄病毒，命名为BYD病毒。BYD病毒的发现一方面解释了这场不明原因的鸭场疾病，另一方面由于黄病毒本身的特点(黄病毒属的大部分成员是重要的人畜共患性病原，可以通过吸血昆虫等媒介传播给人，引起人的感染和发病)，因此鸭黄病毒的公共卫生学意义应引起业界的高度重视。

由于之前在鸭群中尚未发现过黄病毒的感染，本次鸭BYD病毒感染尚属首次爆发和流行，而国内外对黄病毒感染尚缺乏有效地治疗药物，尚无疫苗能够对其进行保护，因此目前还没有有效地治疗和免疫预防措施。

发明内容

本发明的目的在于提供一种预防BYD病毒感染引起鸭产蛋下降综合征的灭活疫苗及其制备方法。

本发明提供了鸭BYD病毒(Family Flaviviridae，GenusFlavivirus，Ntaya virus group，Duck BYD virus)JXSP株，分离自中国河北省白洋淀某鸭场发病鸭脑组织。JXSP株已于2011年9月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，分类命名：鸭BYD病毒，保藏编号为CGMCC No.5266。

本发明的鸭BYD病毒JXSP株属于黄病毒科(Flaviviridae)黄病毒属(flavivirus)。电镜下，病毒粒子呈球形，大小约45-60nm，有一直径约30nm的电子致密的核芯和包裹核芯的脂质囊膜。主要在感染细胞的胞质内复制。病毒基因组为单股正链RNA，大小为10990nt。基因组5’和3’端各有一段非编码区(NCR)，整个基因的编码顺序为5’-NCR-C-PrM-E-NS1-NS2A2B-NS3-NS4A4B-NS5-NCR-3’。

本发明提供了鸭BYD病毒JXSP株在制备疫苗中的应用。

本发明提供了利用鸭BYD病毒JXSP株制备的疫苗。

本发明提供了一种制备鸭BYD病毒JXSP株病毒液的方法，包括如下步骤：

1)将扩大培养的细胞按培养液的1％加入JXSP株病毒种子，37℃，吸附1小时；

2)加入1％胎牛血清维持液，37℃下培养，当细胞病变达75％以上时收获，冻融3次；

3)离心或过滤除去细胞碎片，收集上清液，该上清液即为鸭BYD病毒JXSP株病毒液。

鸭BYD病毒JXSP株可在鸭胚成纤维细胞(DEFs)中培养增殖，并产生CPE(细胞变圆、皱缩、核固缩，呈灶状脱落)，病毒亦能感染BHK-21、Vero细胞并产生CPE，但在PK-15、ST、MDCK等其他细胞上均不产生CPE。因此，上述细胞可选择为BHK-21、Vero和/或鸭胚成纤维细胞。

在本发明的一个实施例中，选择BHK-21细胞进行鸭BYD病毒JXSP株的毒种繁殖实验，具体为：将BYDV-JXSP第2代鸭胚尿囊液毒以无血清DMEM培养基5倍稀释后接种至BHK-21细胞培养中，于5％CO₂培养箱中，37℃静置培养，待75％细胞出现病变时，收获细胞液，冻融2次后取上清100倍稀释后感染接种BHK-21细胞，如此传至第8代，收获细胞液于-70℃保存作为种毒，病毒含量≥10^5.5TCID₅₀/mL。