[发明专利]检测或辅助检测II类细菌素产生菌群体感应信号肽的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测或者辅助检测来源于II类细菌素产生菌代谢物的待检测肽是否含有II类细菌素产生菌群体感应信号肽或是否为II类细菌素产生菌群体感应信号肽的方法。

背景技术

微生物在生长的过程中能够自发产生、释放一些特定的信号分子，并能感知其浓度变化，调节其群体行为，这种现象称为群体感应(Quorum sensing，QS)，产生的信号分子叫做自诱导物(autoinducer，AI)。目前已知很多种类的细菌可以通过群体感应来调控生理行为。目前对一些G-细菌群体感应信号分子——N-酰基高丝氨酸内酯(AHLs)的检测已有很多研究报道和相关专利，如储卫华等“群体感应信号分子及其抑制剂快速检测方法的建立”，郭秀春等“气质联用技术检测海绵共栖细菌中N-酰基高丝氨酸内酯类信号分子”，曹广霞等“细菌群体感应信号分子N-酰基高丝氨酸内酯的检测”，周志刚等“水产病原菌群体感应信号分子的检测方法及其专用试剂盒”。但对于许多产II类细菌素乳酸菌，其信号分子一般为寡肽，由于缺乏相关的遗传背景，对其结构和组成知之甚少，目前还没有群体感应信号肽的检测方法的专利。

自诱导肽(AIP)类化合物是产II类细菌素乳酸菌群体感应中最重要的一类信号分子，调控包括其自身基因在内的一系列细菌素合成调控基因以及结构基因的表达。Saucier等(Saucier L，Poon A，Stiles ME.Induction of bacteriocin in Carnobacterium piscicola LV17.J Appl Mocrobiol，1995，78：684-690)的研究表明自诱导肽可以启动细菌素的合成，Schmitz等(Schmitz S，Hoffmann A，Szekat C，et al.The lantibiotic mersacidin is an autoinducing peptide.Appl Environ Microbiol，2006，72：7270-7277)认为自诱导肽可以诱发细菌素提早合成。快速、简便、有效地检测细菌能否产生AIP，成为深入研究和了解产II类细菌素乳酸菌群体感应的重要手段。

脱脂乳培养基是适合大多数乳酸菌生长的培养基，但许多乳酸菌在脱脂乳培养基中生长缓慢，以此培养基来检测自诱导肽，周期长。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种检测或者辅助检测来源于II类细菌素产生菌代谢物的待检测肽是否含有II类细菌素产生菌群体感应信号肽或是否为II类细菌素产生菌群体感应信号肽的方法。

该方法包括如下步骤：先将II类细菌素产生菌悬浮于无菌生理盐水中，接种于液体改良脱脂乳培养基中培养，在达到稳定期之前的这一时间段中的任一时刻(上述培养体系此时不含有II类细菌素)，向所述液体改良脱脂乳培养基中添加待检测肽，继续培养至10-16h，如13h，得到培养物；检测所述培养物中是否存在所述II类细菌素，按照如下方法确定所述待检测肽是否含有II类细菌素产生菌群体感应信号肽或是否为II类细菌素产生菌群体感应信号肽：若所述培养物中存在所述II类细菌素，则所述待检测肽含有或候选含有所述II类细菌素产生菌的群体感应信号肽，或所述待检测肽为或候选为II类细菌素产生菌群体感应信号肽；反之，则所述待检测肽不含有或候选不含有所述II类细菌素产生菌的群体感应信号肽，或所述待检测肽不为或候选不为所述II类细菌素产生菌的群体感应信号肽。所述II类细菌素产生菌产生II类细菌素受群体感应系统调控；所述待检测肽来源于将所述II类细菌素产生菌在产生II类细菌素状态下进行发酵得到的发酵上清液；所述改良脱脂乳培养基是在脱脂乳培养基中添加酵母浸粉得到的培养基，在所述改良脱脂乳培养基中，所述酵母浸粉、脱脂乳与水的配比为0.5g∶(8-12g)∶100ml，如0.5g∶11g∶100ml。

在本发明的一个实施例中，所述将所述II类细菌素产生菌接种于液体改良脱脂乳培养基中培养，接种量为0.5％(体积比)，培养温度为37℃，培养至指数期，时间为0-12h，如8h。

在本发明的实施例中，所述待检测肽具体是通过包括如下步骤的方法制备得到的：用40％-80％，如60％饱和度的硫酸铵溶液过夜沉淀所述II类细菌素产生菌在产生II类细菌素状态下的发酵上清液，进而得到所述待检测肽。