[发明专利]脱脂乳培养基在检测Ⅱ类细菌素产生菌QS中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种液体脱脂乳培养基的新用途，特别涉及一种液体脱脂乳培养基在检测或辅助检测待检细菌产生II类细菌素是否存在群体感应调控现象中的应用。 

背景技术

群体感应(Quorum Sensing，QS)是指微生物群体某些基因的表达受到与群体密度相关的信号分子调控的现象。即细菌通过合成、分泌自诱导分子(autoinducer，AI)作为信号分子，并能感知其浓度变化，当AI浓度随着细菌群体密度达到一定阈值时，启动特异性基因表达，控相关的生物学功能，如菌体发光、抗生素的生物合成、毒性因子的产生、胞外多糖的合成、细菌丛集、生物膜形成、质粒接合转移、稳定生长期的进入等。 

近些年来，随着生活水平的提高，人们对食品安全的要求也越来越高。世界范围内的食品安全问题日益突出，每年因为食源性病菌导致人类疾病的事件也屡见不鲜。然而，大量使用化学防腐剂可能导致人体不同程度的副作用，比如诱癌、致畸和引起食物中毒等问题。因此，研究者越来越多地关注天然食品防腐剂。 

乳酸菌细菌素是由公认安全的乳酸菌在代谢过程中产生的一类蛋白类抗菌物质，是一类绿色、健康的天然生物防腐剂，主要对与其遗传关系相近的细菌具有杀菌或溶菌作用。乳酸菌产生的细菌素主要有四类，其中，II类细菌素为未经修饰的热稳定疏水性多肽，分子量小于10KDa，不含羊毛硫氨酸。II类细菌素由于其抗菌谱广，稳定性好，可以弥补乳酸链球菌素(nisin)的一些不足，从而成为一类极具发展潜力的食品天然防腐剂。对细菌素的纯化、分子结构、特征、抑菌机理、应用等方面的研究已经进行的较为深入，但对其发酵调控方面的研究尚处于起步阶段。 

目前研究发现，群体感应机制是调控乳酸菌产生II类细菌素行为的重要机制。但已经发现的受群体感应机制调控的II类细菌素产生菌，多为偶然发现。其中，细菌素合成能力丧失的细胞表型的获得是关键。而细菌素合成能力丧失的细胞表型，一般是通过控制接种量及培养温度等因素来获得。但由于大多乳酸菌都采用MRS培养基，培养基中的牛肉膏、蛋白胨等氮源可能会充当自诱导肽的角色，进而干扰通过控制接种量、培养温度等途径对群体感应的认定，影响QS的研究。培养基的选择对群体感应调控现象的研究也有着非常重要的影响。Flynn等的研究发现唾液乳杆菌唾液亚种(Lactobacillus salivarius subsp.salivarius)UCC 118在麦芽汁培养中培养可获得不产细菌素的表型。由于很多乳酸菌都可以在脱脂乳培养基中生长，因此以脱脂乳培养基为研究对象无疑是一个不错的选择。 

虽然已发现许多产II类细菌素乳酸菌，但其细菌素的产生是否受到群体感应机制调控尚未形成一套有效的检测方法。 

发明内容

本发明的一个目的是提供一种液体脱脂乳培养基的新用途。 

本发明所提供的新用途具体为液体脱脂乳培养基在检测或辅助检测待检细菌产生II类细菌素是否存在群体感应调控现象中的应用。所述液体脱脂乳培养基的溶质为脱脂乳，溶剂为水；所述脱脂乳与所述水的配比为8～12g比100ml，pH为6.5～7.0。 

本发明的另一个目的是提供一种检测或辅助检测待检细菌产生II类细菌素是否存在群体感应调控现象的方法。 

该方法包括如下步骤：先将具有产生II类细菌素能力的待检细菌悬浮在无菌生理盐水中(10⁹CFU/mL)，接种于液体脱脂乳培养基中培养，在进入稳定期之前这一时间段中的任一时刻(上述培养体系此时不含有II类细菌素)，然后向所述液体脱脂乳培养基中添加自诱导物，继续培养至50-70h，如60h，得到培养物，检测所述培养物中是否存在所述II类细菌素，按照如下方法确定所述待检细菌II类细菌素的产生是否存在群体感应调控现象：若所述培养物中存在所述II类细菌素，则认为所述待检细菌II类细菌素的产生存在群体感应调控现象或候选存在群体感应调控现象；反之，则认为所述待检细菌II类细菌素的产生不存在群体感应调控现象或候选存在群体感应调控现象。所述自诱导物为将所述待检细菌在产生II类细菌素状态下进行液体发酵得到的发酵上清液。 

在本发明的一个实施例中，所述将具有产生所述II类细菌素能力的待检细菌接种于液体脱脂乳培养基中培养，在进入稳定期之前这一时间段中的任一时刻中，接种量为0.5％(体积比)，培养温度为37℃，培养时间为8-12h，或10～12h。以上为用于检测群体感应调控现象是否存在的培养物的前处理方式。