[发明专利]激光共聚焦扫描显微镜高分子纤维可视化的制备方法

权利要求书

1.一种激光共聚焦扫描显微镜高分子纤维可视化的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)高分子材料溶解在有机溶剂中，加热并冷凝回流至共聚物完全溶解，形成溶液I；

(2)溶液I中加入荧光染料A，搅拌溶解至完全溶解，形成溶液II；

(3)溶液II装入到喷雾装置中的玻璃注射器中，进行静电纺丝的制备，得到包裹了荧光染料A的高分子纤维；

(4)所制备的高分子纤维浸泡在水中，常温下恒温摇床摇晃3～7天，以洗去高分子纤维表面残余的荧光染料A；

(5)将处理后的高分子纤维进行紫外灭菌处理1～2小时；

(6)将灭菌处理的高分子纤维接种上细胞，37℃，5.0％二氧化碳的细胞培养箱中培养；

(7)将细胞用荧光染料标记后，用激光共聚焦显微镜观察，可以选择如下方法中的一种：

a)将细胞用多聚甲醛或甲醛固定后，用荧光染料B将细胞进行标记，即可通过激光共聚焦显微镜直接观察到高分子纤维及其表面生长的细胞；

b)将细胞直接用荧光染料C进行活细胞标记，即可通过激光共聚焦显微镜直接观察到高分子纤维及其表面生长的活细胞；

c)将细胞直接用荧光染料D进行活细胞标记，在激光共聚焦显微镜配套的活细胞培养舱中继续培养，即可通过激光共聚焦显微镜时时动态观察高分子纤维及其表面生长的细胞。

2.根据权利要求1所述激光共聚焦扫描显微镜高分子纤维可视化的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述有机溶剂为氯仿，二氯甲烷，N，N-二甲基甲酰胺，乙酸乙酯中的一种或其组合。

3.根据权利要求1所述激光共聚焦扫描显微镜高分子纤维可视化的制备方法，其特征在于，溶液I中所述高分子材料的浓度为1～15％(g/100ml)；溶液II中所述高分子材料的浓度为1～15％(g/100ml)，荧光染料A的浓度为0.05～0.5％(g/100ml)。

4.根据权利要求1所述激光共聚焦扫描显微镜高分子纤维可视化的制备方法，其特征在于，所述静电纺丝的制备具体操作如下：注射速率为0.1～0.6ml/小时，针尖正极与基片负极间产生5000～12000伏的高压，针尖到接收装置之间的距离为10～30mm，用玻璃片收集经过静电纺丝喷出高分子纤维，收集时间为15～120分钟。

5.根据权利要求1所述激光共聚焦扫描显微镜高分子纤维可视化的制备方法，其特征在于，所述荧光染料A为罗丹明B，异或硫氰罗丹明B，或其他对细胞没有刺激作用的荧光染料，优先选择异硫氰罗丹明B。

6.根据权利要求1所述激光共聚焦扫描显微镜高分子纤维可视化的制备方法，其特征在于，所述荧光染料B为标记多聚甲醛或甲醛固定后细胞的荧光染料，为钙黄绿素，或鬼笔环肽，优先选择鬼笔环肽。

7.根据权利要求1所述激光共聚焦扫描显微镜高分子纤维可视化的制备方法，其特征在于，所述荧光染料C为标记活细胞的荧光染料，为钙黄绿素乙酰甲酯，或二乙酸荧光素，优先选择二乙酸荧光素。

8.根据权利要求1所述激光共聚焦扫描显微镜高分子纤维可视化的制备方法，其特征在于，所述荧光染料D为长时间标记活细胞的荧光染料，为钙黄绿素乙酰甲酯，或二乙酸荧光素，优先选择钙黄绿素乙酰甲酯。

9.根据权利要求1所述激光共聚焦扫描显微镜高分子纤维可视化的制备方法，其特征在于，所述高分子材料为聚乳酸，聚3-羟基丁酸酯，聚乳酸-乙醇酸，聚己内酯，聚(乳酸-乙烯酸)中的一种或其组合。

10.根据权利要求1所述激光共聚焦扫描显微镜高分子纤维可视化的制备方法，其特征在于，所述高分子纤维的平均直径为0.9～4.0μm。