[发明专利]神经毡蛋白-1配体多肽-聚乙二醇-磷脂复合物、其主动靶向脂质体载体系统及其制备方法

权利要求书

1.一种神经毡蛋白-1配体多肽-聚乙二醇-磷脂复合物，其特征在于该复合物由神经毡蛋白-1配体多肽、聚乙二醇和磷脂三部分通过共价连接而成的线性嵌段共聚物，其中神经毡蛋白-1配体多肽、聚乙二醇和磷脂的摩尔比为1:1:1，所述的神经毡蛋白-1配体多肽的氨基酸序列为：RPAKPAR。

2.根据权利要求1所述的神经毡蛋白-1配体多肽-聚乙二醇-磷脂复合物，其特征是所述的聚乙二醇的重均分子量为400~8000。

3.根据权利要求2所述的神经毡蛋白-1配体多肽-聚乙二醇-磷脂复合物，其特征是所述的聚乙二醇重均分子量为2000~5000。

4.根据权利要求1所述的神经毡蛋白-1配体多肽-聚乙二醇-磷脂复合物，其特征是所述的磷脂为：二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、二油酰磷脂酰乙醇胺、氢化大豆磷脂酰乙醇胺、氢化蛋磷脂酰乙醇胺、大豆磷脂酰乙醇胺或蛋磷脂酰乙醇胺。

5.一种主动靶向脂质体载体系统，含有根据权利要求1、2、3或4所述的神经毡蛋白-1配体多肽-聚乙二醇-磷脂复合物，其特征在于该载体系统的组成为：

a.磷脂；

b.胆固醇；

c.甲氧基聚乙二醇-磷脂复合物；

d.神经毡蛋白-1配体多肽-聚乙二醇-磷脂复合物；

上述各成分之间的摩尔比为：a:b=5:1~1:5，a:c=1000:1~1000:100，a:d=1000:0.1~1000:100。

6.根据权利要求5所述的主动靶向脂质体载体系统，其特征是组分a所述的磷脂为：蛋磷脂、氢化大豆磷脂酰胆碱、氢化蛋磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、1-肉豆蔻酰-2-棕榈酰磷脂酰胆碱 、1-棕榈酰-2-硬脂酰磷脂酰胆碱、1-硬脂酰-2-棕榈酰磷脂酰胆碱、1-棕榈酰-2-油酰磷脂酰胆碱、1-硬脂酰-2-亚油酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱、氢化二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酸、二肉豆蔻酰磷脂酸、二棕榈酰磷脂酸、二棕榈酰磷脂酸、二硬脂酰磷脂酸、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、脑磷脂酰丝氨酸、二肉豆蔻酰磷脂酰丝氨酸、二棕榈酰磷脂酰丝氨酸、蛋磷脂酰甘油、二月桂酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰甘油、脑鞘磷脂、二棕榈酰鞘磷脂或二硬脂酰鞘磷脂。

7.根据权利要求5所述的主动靶向脂质体载体系统，其特征是所述的甲氧基聚乙二醇-磷脂复合物中的磷脂为：二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、二油酰磷脂酰乙醇胺、氢化大豆磷脂酰乙醇胺、氢化蛋磷脂酰乙醇胺、大豆磷脂酰乙醇胺或蛋磷脂酰乙醇胺。

8.根据权利要求5所述的主动靶向脂质体载体系统，其特征是所述的甲氧基聚乙二醇-磷脂复合物中的甲氧基聚乙二醇重均分子量为400~6000。

9.一种制备根据权利要求5、6、7或8所述的主动靶向脂质体载体系统的方法，其特征在于该方法的具体步骤为：分别称取上述各组分溶于氯仿中制备得到均匀脂质膜，真空干燥；再加入0.155M的硫酸铵溶液，在20-70℃水浴中震荡得到脂质体混悬液；再于20-70℃水浴中依次挤压过400、200、100和50nm核孔膜，得空白脂质体，即为含有神经毡蛋白-1配体多肽-聚乙二醇-磷脂复合物的主动靶向脂质体载体系统。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于所述的神经毡蛋白-1配体多肽-聚乙二醇-磷脂复合物的制备方法的具体步骤为：

a.将取代度为0.6mmol/g的叔丁氧羰基-精氨酸（对甲苯磺酰基）-对乙酰氨基苄酯Boc-Arg(Tos)-PAM树脂用 N，N-二甲基甲酰胺DMF溶胀，抽干；再用三氟乙酸TFA脱去Boc保护基，抽去TFA；

b.用苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐HBTU的DMF溶液和N,N-二异丙基乙胺DIEA活化叔丁氧羰基-丙氨酸Boc-Ala，得Boc-Ala活化液；

c.将步骤a所得树脂用DMF洗涤后加入步骤b所得的Boc-Ala活化液，25℃振摇反应25分钟，抽去反应液，并用DMF洗涤树脂；

d.重复步骤a—c，按CRPAKPAR序列顺次连接其余氨基酸；反应结束后洗涤树脂、TFA脱保护基，真空干燥；

e.将步骤d所得的树脂放入多肽切割管中，加入适量P-cresol，然后通入HF，冰浴搅拌反应1小时；反应结束后减压抽去管中HF，残液用适量冰乙醚沉淀，过滤得沉淀并用冰乙醚洗涤沉淀；沉淀重新用TFA溶解，过滤得滤液；滤液再于冰乙醚中沉淀，过滤，滤渣以水复溶，冻干得CRPAKPAR纯品；

f.将步骤e得到的CRPAKPAR溶于pH7.0的PBS溶液中，取马来酰亚胺-聚乙二醇-磷脂复合物Mal-PEG-DSPE溶于DMF，搅拌反应至Mal-PEG-DSPE反应完全，去除过量的CRPAKPAR和DMF，冷冻干燥，得到直链的神经毡蛋白-1配体多肽-聚乙二醇-磷脂复合物。