[发明专利]一种高灵敏度酶联免疫吸附分析方法

权利要求书

1.一种高灵敏度酶联免疫吸附分析方法，其特征在于，所述方法将高灵敏度的化学振荡检测和高度特异性的酶联免疫诊断技术巧妙地结合起来，以化学振荡法代替分光光度法，检测酶联免疫分析中底物及其产物浓度的变化，从而建立基于化学振荡动力学检测的酶联免疫诊断技术；所述方法根据被测物与抗体或抗原特异性结合的特性，在一定温度和时间内，以相应的酶标记抗原或抗体与对应的抗体或抗原完成吸附结合过程，它利用标记的酶对底物的催化速度来间接表示被测物的浓度，而底物或底物的酶促反应产物浓度的检测手段为化学振荡动力学检测法；

所述酶联免疫吸附吸附测定分析方法可以是间接法、双抗体夹心法、双位点一步法、竞争法、捕获法、生物素-亲和素法；

所述酶联免疫吸附吸附法中酶的检测体系可以是：A, 双氧水/辣根过氧化物酶体系，对应供氢体为邻苯二胺，四甲替联苯胺，氨基水杨酸，邻联苯甲胺，2,2-连胺基-2(3-乙基-并噻唑啉磺酸-6)铵盐；B，碱性磷酸酯酶体系，底物为苯酚磷酸盐、维生素C磷酸酯、4-硝基酚磷酸酯(PNP)或萘酚-AS-Mx磷酸盐+重氮盐；C，β-Ｄ－半乳糖苷酶体系，底物为4MuG或ONPG；D，苹果酸脱氢酶体系，底物为苹果酸；E，葡萄糖氧化酶体系；

所述酶联免疫吸附吸附法中酶的检测体系也可以采用多酶级联放大系统代替单一的辣根过氧化酶或碱性磷酸酶系统，以提高酶对最终底物的催化反应能力，如生物素和亲和素系统，AP及醇脱氢酶、黄递酶组成酶级联底物放大系统，酶抑制级联放大系统，凝固因子酶级联放大系统；

所述化学振荡动力学检测的检测体系为B-Z振荡反应，B-L振荡体系，B-R振荡反应,铜催化振荡反应，二氧化氯化学振荡反应，过氧化酶–氧化酶生化振荡体系，高锰酸盐振荡反应，液膜振荡反应体系。

2.根据权利要求1所述的一种高灵敏度酶联免疫吸附分析方法，所述方法将高灵敏度的化学振荡动力学检测和具有专一性和灵敏度放大作用的酶催化动力学分析结合起来，让化学振荡检测只检测被测定物，避免了其它杂质的干扰，克服了化学振荡选择性低、不能进行定性测定的问题,使化学振荡可以进行定性定量测定；有效选择的酶联免疫的酶、底物、以及化学振荡反应体系可以大幅度提高酶联免疫检测的灵敏度。

3.根据权利要求1所述的一种高灵敏度酶联免疫吸附分析方法，所述化学振荡动力学检测的检测体系中，在铜催化的B-Z振荡体系、B-L振荡体系、B-R振荡反应中，底物可以是氧化还原电极电势在1.0 V以下，具有活性亚甲基的多氧有机化合物，如丙二酸、酒石酸、没食子酸、焦性没食子酸、乳酸、丙酮、马来酸、柠檬酸、苹果酸、乙酰丙酮、乙酰乙酸乙酯。

4.根据权利要求1所述的一种高灵敏度酶联免疫吸附分析方法，所述化学振荡反应中的催化剂可以是M^(n+l)+/ Mⁿ⁺电极电位在1.00-1.51V之间的过渡金属离子或过渡金属离子配合物，如Ce³⁺/Ce⁴⁺(1.44V)，Mn²⁺/Mn³⁺(1.44V)， Ru(bpy)₂²⁺/ Ru(bpy)₃³⁺，Fe(phen)₂²⁺/Fe(phen)₃³⁺ 以及 Cu²⁺ 、Ni ²⁺与四氮大环配合物。

5.根据权利要求1所述的一种高灵敏度酶联免疫吸附分析方法，所述化学振荡的测定体系可以是封闭体系；可以是连续流动搅拌的开放体系，它利用分析物脉冲微扰技术，向远离平衡态的振荡体系中以脉冲的方式注入不同浓度的被分析物种；也可以利用分岔前所处的亚临界状态体系进行测定。

6.根据权利要求1所述的一种高灵敏度酶联免疫吸附分析方法，所述化学振荡特点的测定指标可以是诱导期的改变、加入底物前后电位的改变或加入底物前后的振荡周期的改变。