[发明专利]TP抗体检测法及其检测试剂盒

权利要求书

1.一种基于小分子间接标记的双抗原夹心法测定梅毒螺旋体抗体的方法，其特征在于，包括步骤：

a)用小分子物质标记第一梅毒螺旋体抗原；

b)用第二梅毒螺旋体抗原包被固相材料；

c)以信号生成物质标记抗小分子物质抗体或能与小分子结合的物质，制备成信号报告分子；

d)利用固相材料表面的第二梅毒螺旋体抗原及小分子物质标记的第一梅毒螺旋体抗原与样本中梅毒螺旋体抗体发生免疫反应，形成双抗原夹心复合物；

然后，利用信号报告分子与小分子物质的结合反应，使形成带有可检测的信号生成物质，用于检测样本中梅毒螺旋体抗体的含量。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤a)中，小分子物质包括：(1)生物素分子；(2)分子量小于10000的小分子半抗原；

标记的方法，包括：

(1)基于有机化学原理的小分子物质与蛋白质或多肽之间的连结方法；

(2)基于酶化学和基因重组技术的小分子物质与蛋白质或多肽之间的连结方法。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述小分子半抗原，包括：地高辛、荧光素、甲状腺素、雌二醇、雌三醇、三碘甲腺原氨酸、睾酮、孕酮。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤a)、b)中，第一、第二梅毒螺旋体抗原，包括：通过基因工程技术制备的梅毒螺旋体重组抗原，或通过合成方法制备的梅毒螺旋体特异性多肽。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤b)中，固相材料，包括：微孔反应板、试管、塑料颗粒或塑料微粒、磁微粒；

包被的步骤，包括：

(1)将梅毒螺旋体抗原溶解于包被缓冲液后，浸泡固相材料，静置12～36小时；

(2)用含表面活性剂的缓冲液洗涤步骤(1)制备的梅毒螺旋体抗原包被的固相材料后，加入含酪蛋白的缓冲液，静置8～24小时；

(3)弃去缓冲液，干燥固相材料，从而完成梅毒螺旋体抗原包被固相材料的制备。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)中，包被缓冲液是50mM pH7.8TSA缓冲液，其中，该缓冲液中含有：50mM Tris、150mM NaCl、1％BSA、16％的蔗糖；

步骤(2)中，含表面活性剂的缓冲液，是含0.1％Tween-20的50mM pH7.8TSA缓冲液；含酪蛋白的缓冲液，是含2％酪蛋白的0.1％Tween-20的50mM pH7.8TSA缓冲液。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤c)中，信号生成物质，包括：酶、荧光物质、稀土离子、化学发光物质、电化学发光物质；

能与小分子结合的物质，包括：链亲和素；

其中，酶，包括：辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶；

荧光物质，包括：异硫氰酸荧光素、荧光素；稀土离子，包括：Eu³⁺、Sm³⁺、Tb³⁺、Dy³⁺及其螯合物配基；化学发光物质，包括：丫啶酯及其衍生物；电化学发光物质，包括：多环芳烃类、酰肼类、联吡啶类化合物以及三联吡啶钌。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤d)中，样本，包括：全血、血清、血浆、尿液、唾液；

梅毒螺旋体抗体，包括：由侵入人体的梅毒螺旋体所引发的抗体；

步骤d)中，检测样本中梅毒螺旋体抗体的步骤，包括：

(1)直接在容器中加入未经稀释的样本；

(2)加入小分子物质标记的梅毒螺旋体抗原，利用固相材料表面的梅毒螺旋体抗原以及小分子物质标记的梅毒螺旋体抗原与样本中的梅毒螺旋体抗体反应；

(3)洗涤固相材料后，加入信号报告分子，使其与固相材料表面的小分子物质结合，形成带有信号生成物质的可检测复合物；

(4)洗涤固相材料后，加入酶底物测量信号，或直接引发并测量信号，根据信号报告分子所产生的信号强弱确定样本中梅毒螺旋体抗体的阴阳性或抗体滴度。