[发明专利]一种体外检测日本血吸虫尾蚴对吡喹酮抗药性的方法

说明书

技术领域

一种体外检测日本血吸虫尾蚴对吡喹酮抗药性的方法，属于抗寄生虫药物技术领域。

背景技术

日本血吸虫病是一种危害人类健康，影响社会经济发展的重大传染病。吡喹酮是当前用于治疗日本血吸虫病的唯一商品化药物。长期大规模反复应用同一种抗虫药物往往会导致药物抗药性的产生，因此有必要建立现场监测和检测吡喹酮抗药性的技术。当前检测吡喹酮抗药性的主要方法是在疫区现场治疗病人，评估化疗结果，该方法时间长、病人依次性低，且存在漏查漏治现象。我们在实验室内建立了一种体外检测日本血吸虫尾蚴对吡喹酮抗药性的技术，可方便、快速、敏感检测日本血吸虫尾蚴对吡喹酮的抗药性，解决了吡喹酮抗药性难以检测的技术难题，有利于现场监测和检测日本血吸虫吡喹酮抗药性的产生。

发明内容

本发明的目的是提供一种体外检测日本血吸虫尾蚴对吡喹酮抗药性的方法，解决现场监测和检测日本血吸虫吡喹酮抗药性的技术问题，快速、简便、敏感、可靠。

本发明的技术方案：一种体外检测日本血吸虫尾蚴对吡喹酮抗药性的方法，取一块24孔细胞培养板，在板孔内加入浓度分别为10^-5、5×10^-6、10^-6和5×10^-7 mol/L吡喹酮药液1 mL，随后用接种环移入20~50条新逸出的日本血吸虫尾蚴，在吡喹酮药液作用20 min后在解剖镜下观察各孔内尾蚴断尾变化，计算尾蚴断尾率。实验重复6次。通过观察尾蚴断尾率，可检测日本血吸虫尾蚴对吡喹酮的抗药性。

尾蚴断尾变化，是指在吡喹酮药液作用后，日本血吸虫尾蚴的体部和尾部分离断开。

吡喹酮药液为吡喹酮溶于1％二甲基亚砜（DMSO）中配制成浓度为1×10^-3 mol/L与水稀释备用。

一种体外检测日本血吸虫尾蚴对吡喹酮抗药性的方法，先在24孔细胞培养板孔内加入浓度分别为10^-5、5×10^-6、10^-6和5×10^-7 mol/L吡喹酮药液各1 mL，然后用接种环移入20～50条新逸出的日本血吸虫尾蚴，在吡喹酮药液作用20 min后，在解剖镜下观察尾蚴断尾变化，计算尾蚴断尾率。实验重复6次。在经10^-5 mol/L吡喹酮药液作用20 min后，尾蚴断尾率< 40%；经5×10^-6 mol/L吡喹酮药液作用20 min后，尾蚴断尾率< 35%；经10^-6 mol/L吡喹酮药液作用20 min后，尾蚴断尾率< 30%；经5×10^-7 mol/L吡喹酮药液作用20 min后，尾蚴断尾率< 10%，则可认为该日本血吸虫尾蚴对吡喹酮具有抗药性。

本发明的有益效果：一种体外检测日本血吸虫尾蚴对吡喹酮抗药性的方法，快速、简便、敏感、可靠，适合现场快速检测和监测日本血吸虫吡喹酮抗药性的产生，可解决日本血吸虫吡喹酮抗药性现场检测和监测的技术问题。

具体实施方式

实施例1：日本血吸虫吡喹酮敏感株和抗性株尾蚴对吡喹酮的敏感性测定

取一块24孔细胞培养板，在板孔内加入浓度为10^-5 mol/L的吡喹酮药液1 mL，随后用接种环移入20~50条新鲜逸出的日本血吸虫吡喹酮敏感株和抗性株尾蚴，20 min后在解剖镜下观察各孔内尾蚴断尾变化，计算尾蚴断尾率。实验重复6次。

表1  吡喹酮对日本血吸虫吡喹酮敏感株和抗性株尾蚴断尾变化的影响