[发明专利]一种基于家蚕杆状病毒多角体溶解特性的融合蛋白纯化方法

权利要求书

1.一种在原核表达载体中表达外源蛋白的方法，其特征在于：将家蚕多角体基因(Polh)与外源目的蛋白基因置于同一阅读框中进行融合表达，所述家蚕多角体基因与外源目的蛋白基因之间包括编码蛋白酶酶切位点的linker；

所述的家蚕多角体基因、编码蛋白酶酶切位点的linker以及外源目的蛋白基因三者之间可操作性的连接；

所述的家蚕多角体基因还带有纯化和/或鉴定标签；

用针对linker编码酶切位点的蛋白酶切割所表达的融合蛋白，能够产生外源目的蛋白。

2.一种核酸构建体，其包括一个与启动子可操作性连接、并由该启动子控制的阅读框，所述的阅读框包括家蚕多角体基因(Polh)、编码蛋白酶酶切位点的linker以及外源目的蛋白基因；

所述外源蛋白基因通过限制性核酸内切酶位点与所述核酸构建体的其它部分可操作性地连接；

所述的家蚕多角体基因还带有纯化和/或鉴定标签。

3.利用权利要求2所述的核酸构建体构建的原核或真核表达载体。

4.利用权利要求3所述的载体建立的细胞。

5.利用权利要求3所述的载体或权利要求4所述的细胞表达外源目的蛋白的方法。

6.一种如权利要求1-2，4或5之一所述方法表达的外源蛋白的纯化方法，其特征在于：将所表达的融合蛋白沉淀溶解于强碱性溶液中，离心收集上清，然后将pH值调至6.0-8.0的近中性，离心收集沉淀即为纯化后的融合蛋白，所述的强碱性溶液pH值为11-14。

7.如权利要求5所述的外源蛋白的纯化方法，其特征在于：将所表达的融合蛋白沉淀溶解于强碱性溶液之前，先用弱碱性溶液洗涤沉淀1-3次，所述弱碱性溶液的pH值为8.0-10.0。

8.如权利要求5或6所述的外源蛋白的纯化方法，其特征在于：将纯化后的融合蛋白用针对linker编码酶切位点的蛋白酶进行切割，分离纯化所述外源目的蛋白。

9.如权利要求7或8所述的外源蛋白纯化方法，其特征在于：通过相应于所述家蚕多角体基因上纯化和/或鉴定标签的纯化方法分离纯化所述外源蛋白。