[发明专利]一种与耐氯嘧磺隆相关蛋白及其编码基因与应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种与耐氯嘧磺隆相关蛋白及其编码基因与应用。

背景技术

现代生物技术已引起农业中若干领域的重大变革，其中最突出的是将外源基因导入植物体中的表达，给作物育种带来革命性的变化，使人们摆脱了利用传统杂交技术培育新品种的局面，进入自由构建遗传性状的新时代。通过遗传工程培育转基因抗除草剂作物品种是发展最快、研究最深、农民接受程度最高的案例，其中最关键的环节是抗除草剂基因的获得，从突变的抗除草剂植物和微生物体中分离抗性基因是最主要途径。

乙酰乳酸合成酶抑制剂类除草剂通过抑制植物体内的乙酰乳酸合成酶活性，从而阻止支链氨基酸的合成，导致蛋白质的合成受到破坏，阻碍细胞分裂期的DNA合成，从而使植物细胞的有丝分裂停止在G1阶段的S期(DNA合成期)和G2阶段的M期，干扰了DNA的合成，细胞因此不能完成有丝分裂，进而使植物停止生长，最终导致植物个体死亡。

Lawther等(1978)首先在大肠杆菌(Escherichia coli)中发现并克隆到了乙酰乳酸合成酶基因。Falco等(1985)在酵母(Saccharomyces cerevisiae)中也发现并克隆到了其ALS基因，各国科学家花费了大量精力去研究各物种中的乙酰乳酸合成酶基因，到目前为止，可在NCBI中搜索到与乙酰乳酸合成酶基因相关的相关信息多达上千条，概括起来至少来源于50个不同的生物种类。随着抗除草剂乙酰乳酸合成酶基因的不断发现和分离，通过转化抗性基因培育抗乙酰乳酸合成酶抑制剂类除草剂作物发展突飞猛进。至今，通过转化乙酰乳酸合成酶酶突变基因，创制出了抗乙酰乳酸合成酶抑制剂类除草剂的大豆、玉米、小麦、水稻、油菜、烟草、亚麻等多种作物的抗性品系(Saari L L.et al，1996；James C，1999；Baylis A D，2000；苏少泉，2002；James C，2009)。

发明内容

本发明的目的是提供一种与耐氯嘧磺隆相关蛋白及其编码基因与应用。

本发明提供的蛋白，是如下(a)或(b)：

(a)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(b)将序列表中序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与耐氯嘧磺隆相关的由序列2衍生的蛋白质。

上述蛋白中，一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加是指不多于十个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加。

上述的序列2由690个氨基酸组成。

编码上述蛋白的基因也是本发明保护的范围。

上述编码基因为如下(1)或(2)或(3)的DNA分子：

(1)序列表中序列1所示的DNA分子；

(2)在严格条件下与(1)限定的DNA序列杂交且编码与耐氯嘧磺隆相关蛋白的DNA分子；

(3)与(1)限定的DNA序列至少具有70％、至少具有75％、至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％同源性且编码与耐氯嘧磺隆相关蛋白的DNA分子。

上述编码基因中，所述严格条件可为如下：在6×SSC，0.5％SDS的溶液中，在65℃下杂交，然后用2×SSC，0.1％SDS和1×SSC，0.1％SDS各洗膜一次。

上述的序列1由2073个脱氧核苷酸组成，自5’端的第1至2073位核苷酸为蛋白的开放阅读框(Open Reading Frame，ORF)，组成。

含有所述基因的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌也是本发明保护的范围。

上述重组载体具体为将所述蛋白的编码基因插入pGBKT7载体的BamH I和Sal I酶切位点间，得到表达上述蛋白的重组载体。

上述重组菌为将上述的重组载体转入宿主菌中得到的重组菌，在本发明的实施例中，上述宿主菌具体为BL21(DE3)。

扩增上述基因全长或其任意片段的引物对也是本发明保护的范围；

在本发明的实施例中，上述引物对的一条引物的核苷酸序列具体为序列表中的序列3，上述引物对中的另一条引物的核苷酸序列具体为序列表中的序列4。

本发明的另一个目的是提供一种耐氯嘧磺隆产品。