[发明专利]一种对苯丙氨酸羟化酶基因进行测序的方法及试剂盒

权利要求书

1.一种对苯丙氨酸羟化酶基因进行测序的方法，其特征在于，包括以下步骤：

A.利用PAH基因特异性引物，对待测样品中的多个目标区域进行扩增，并基于扩增产物构建测序文库；

B.对测序文库进行单分子扩增，得到与所述多个目标区域对应的多个单分子扩增产物；

C.同时对所述多个单分子扩增产物进行高通量基因测序，得到所述多个目标区域的序列信息。

2.根据权利要求1所述的对苯丙氨酸羟化酶基因进行测序的方法，其特征在于，所述步骤A包括以下步骤：

A1.利用PAH基因特异性引物，对待测样品中的多个目标区域进行扩增，得到与所述多个目标区域对应的扩增产物；

A2.利用接头元件，与所述多个目标区域对应的扩增产物进行连接，得到测序文库；所述接头元件采用平末端接头、突出末端接头、带茎环结构的接头和分叉接头中的至少一种。

3.根据权利要求2所述的对苯丙氨酸羟化酶基因进行测序的方法，其特征在于，所述步骤A2包括以下步骤：

A21.对与所述多个目标区域对应的扩增产物进行片段化，得到片段化产物；

A22.利用接头元件，与所述片段化产物进行连接，构建测序文库。

4.根据权利要求3所述的对苯丙氨酸羟化酶基因进行测序的方法，其特征在于，所述步骤A22包括以下步骤：

A221.利用第一接头与片段化产物的两端连接，得第一连接产物；

A222.环化第一连接产物，得环化产物；

A223.II s型限制性内切酶酶切环化产物，得酶切产物；

A224.在酶切产物两端接上第二接头和第三接头，得测序文库。

5.根据权利要求3所述的对苯丙氨酸羟化酶基因进行测序的方法，其特征在于，所述步骤A22包括以下步骤：

A221’.利用第四接头与片段化产物连接，得第二连接产物；

A222’.II s型限制性内切酶酶切第二连接产物，得带有第四接头的酶切片段；

A223’.带有第四接头的酶切片段与第五接头连接，形成测序文库。

6.根据权利要求2至5任一项所述的对苯丙氨酸羟化酶基因进行测序的方法，其特征在于，步骤A2所述的接头元件中的至少一个接头包含有第一标签序列，用于在文库构建过程中，对不同待测样品的测序文库进行标记。

7.根据权利要求1至5任一项所述的对苯丙氨酸羟化酶基因进行测序的方法，其特征在于，每个目标区域对应的特异性引物中，至少有一条引物与该目标区域部分互补，该部分互补的引物的5’端包含有第二标签序列，用于在扩增目标区域过程中，对不同待测样品的目标区域扩增产物进行标记。

8.一种对苯丙氨酸羟化酶基因进行测序的试剂盒，其特征在于，包括：

PAH基因特异性引物，用于对待测样品中的多个目标区域进行扩增；

接头元件，用于与扩增产物结合构建测序文库。

9.根据权利要求8所述的对苯丙氨酸羟化酶基因进行测序的试剂盒，其特征在于，所述接头元件采用平末端接头、突出末端接头、带茎环结构的接头和分叉接头中的至少一种。

10.根据权利要求8所述的对苯丙氨酸羟化酶基因进行测序的试剂盒，其特征在于，所述接头元件中的至少一个接头包含有第一标签序列，用于在文库构建过程中，对不同待测样品的测序文库进行标记。

11.根据权利要求8至10任一项所述的对苯丙氨酸羟化酶基因进行测序的试剂盒，其特征在于，每个目标区域对应的特异性引物中，至少有一条引物与该目标区域部分互补，该部分互补的引物的5’端包含有第二标签序列，用于在扩增目标区域过程中，对不同待测样品的目标区域扩增产物进行标记。