[发明专利]一种蓖麻碱的水提方法及提取物的应用以及蓖麻碱的毒性评价方法

权利要求书

1.一种蓖麻碱的水提方法，其特征在于：步骤如下：

(1)将蓖麻籽壳∶蓖麻老叶＝5∶1m/m的比例进行混合，按水∶粉碎料＝10∶1加水；

(2)将混合粉碎料在60℃恒温水浴，磁力搅拌，回流提取4h；

(3)用超声波技术再次对上述混合料液进一步提取，过滤，回收提取液；

(4)放入50℃干燥箱内进行干燥；

(5)干燥所得固体加入100mL蒸馏水，加热溶解并用1％的盐酸调pH为2-3，过滤，溶液用1％氨水调pH为9，过滤，溶液50℃进行真空干燥，得蓖麻碱。

2.一种由权利要求1所述的蓖麻碱的水提方法制备的蓖麻碱水提物，其特征在于：步骤如下：

(1)将蓖麻籽壳∶蓖麻老叶＝5∶1m/m的比例进行混合，按水∶粉碎料＝10∶1加水；

(2)将混合粉碎料在60℃恒温水浴，磁力搅拌，回流提取4h；

(3)用超声波技术再次提取蓖麻碱对上述混合料液进一步提取，过滤，回收提取液；

(4)合并步骤(2)和(3)的滤液。

3.一种蓖麻碱的毒性评价方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)蓖麻碱对储粮害虫的趋避效果测定。采用药膜选择法；

(2)蓖麻碱对储粮害虫熏蒸效果测定，采用广口瓶密闭熏蒸法；

(3)线虫对蓖麻碱水提物的毒性评价，蓖麻碱对秀丽线虫的致死率试验；

(4)蓖麻碱对线虫生殖能力影响的试验；

(5)蓖麻碱对线虫体长影响的试验；

(6)蓖麻碱对线虫体内酶活力的影响的试验。

4.根据权利要求3所述蓖麻碱的毒性评价方法，其特征在于：所述步骤(1)的具体方法如下：用热水溶液做溶剂将蓖麻碱配成不同浓度的药液，将直径为9cm的圆形滤纸裁成相同的两半，分别滴加0.5mL的蓖麻碱溶液和等量蒸馏水溶液为对照，待溶剂挥发干后，将两半滤纸用胶纸粘定，置入直径为9cm的培养皿内，每皿接入试虫30头，将培养皿放入生测室内，温度30℃±1℃，湿度：75％±5％，分别于处理24、48、72h后观查成虫分布状况，计算其驱避率。

5.根据权利要求3所述蓖麻碱的毒性评价方法，其特征在于：所述步骤(2)的具体方法如下：在1000mL广口瓶，中央悬挂一个3cm x 11cm滤纸片，接入30头试虫，迅速用微量加样器分别在滤纸上滴加不同体积1mg/mL蓖麻碱溶液，迅速用瓶塞将瓶口封好，对照用蒸馏水溶剂处理。将各处理瓶置于生测室内，温度30℃±1℃，湿度：75％±5％，分别于24、48、72h后观查击倒虫数，72h后打开瓶塞，散气后将试虫倒入干净的培养皿内，计算死亡数。

6.根据权利要求4所述蓖麻碱的毒性评价方法，其特征在于：所述步骤(1)的具体方法如下：将线虫同期化发育为L4期后，转入含有相应浓度蓖麻碱提取物的NGM板内，实验板中含12.5mg/L5-Fu并置于20℃下培养。每组实验样本数60条左右，24、48、72、96、120h，并计算死亡率。对线虫死亡判断标准：线虫不无移动及无吞咽动作，轻触后仍无任何反应。

7.根据权利要求4所述蓖麻碱的毒性评价方法，其特征在于：所述步骤(2)的具体方法如下：挑取L4期线虫至各组单独转入NGM板，每24h移至新的NGM板，直至线虫产卵期结束；产卵板在20℃培养24h记录子代数目；产卵期为L4期结束到产卵结束；所有数据连续测定10只以上的秀丽线虫，然后取平均值。

8.根据权利要求4所述蓖麻碱的毒性评价方法，其特征在于：所述步骤(3)的具体方法如下：从空白平板和含有蓖麻碱的实验板中随机挑取同期化后L1期的线虫，然后用热水将其烫死，在装有视觉透视标度的解剖显微镜下测量其长度；每24h从培养板中挑取线虫，连续测量5d线虫体长，每次每组三个平行，并记录测量结果。

9.根据权利要求4所述蓖麻碱的毒性评价方法，其特征在于：所述步骤(4)的具体方法如下：将线虫同期化发育为L4期后，转入含有相应浓度蓖麻碱提取物的NGM板内；

实验板中含12.5mg/L5-Fu并置于20℃下培养，每组实验样本数60条，用无菌水将线虫定容到200μL，移入匀浆器中置于冰上匀浆，匀浆液定容至500μL，加入1％Chaps buffer至1mL，冰上置冷5min，4℃，5000r/min离心10min，收集上清液4℃保存；

通过测定线虫体内黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子自由基，后者氧化羟胺成亚硝酸盐，在显色剂的作用下呈现紫红色，用可见分光光度计测其吸光度。