[发明专利]一种重组表达水痘-带状疱疹病毒截短型糖蛋白E的方法及其应用

权利要求书

1.一种重组表达水痘-带状疱疹病毒截短型糖蛋白E的方法，是将去除跨膜区(疏水区)和胞内区并添加His标签的水痘-带状疱疹病毒(Varicella-Zoster Virus，VZV)截短型糖蛋白E(glycoproteinE，gpE)的基因导入宿主细胞中，经表达得到重组水痘-带状疱疹病毒截短型糖蛋白E。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述His标签位于水痘-带状疱疹病毒截短型糖蛋白E的羧基(C)端。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述添加His标签的水痘-带状疱疹病毒截短型糖蛋白E的基因可通过位点特异性整合系统Flp/FRT导入宿主细胞，具体方法为：将添加His标签的水痘-带状疱疹病毒截短型糖蛋白E的基因插入载体pcDNA5/FRT/TO的多克隆位点中，再将该携带添加His标签的水痘-带状疱疹病毒截短型糖蛋白E的基因的中间载体与携带FLP酶基因的pOG44质粒共转染宿主细胞FLP-In-CHO，经筛选得到整合有添加His标签的重组水痘-带状疱疹病毒截短型糖蛋白E的宿主细胞。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：在所述通过位点特异性整合系统Flp/FRT导入宿主细胞的中间载体中，所述添加His标签的水痘-带状疱疹病毒截短型糖蛋白E的基因的上游为P_CMV启动子，下游为FRT位点和筛选标记，所述筛选标记可为潮霉素B抗性基因、新霉素抗性基因或杀稻瘟素抗性基因等任一可用的筛选标记基因；以pcDNA5/FRT/TO为出发载体构建的携带添加His标签的水痘-带状疱疹病毒截短型糖蛋白E的基因的重组载体为pcDNA5/FRT/TO-gpE-His。

5.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述筛选条件为：用浓度为200-400μg/mL的潮霉素筛选1-3周。

6.用权利要求1-5任一项所述重组表达方法得到的重组水痘-带状疱疹病毒截短型糖蛋白E。

7.权利要求6所述的重组水痘-带状疱疹病毒截短型糖蛋白E在抗水痘-带状疱疹病毒免疫球蛋白的ELISA检测方法中的应用。

8.一种抗水痘-带状疱疹病毒免疫球蛋白的ELISA检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求6所述的重组水痘-带状疱疹病毒截短型糖蛋白E。

9.根据权利要求8所述ELISA检测试剂盒，其特征在于，还包括：包被缓冲液，包被蛋白浓度1μg/mL；50×漂洗缓冲液20ml；anti-VZV IgG国际标准品NIBSC(50IU/ml)200μl；HRP标记羊抗人IgG(H+L)抗体20μl；可溶性TMB显色底物20ml；反应终止液20ml。