[发明专利]以PAC-PB1N复合物为靶点的抗流感病毒抑制剂的高通量筛选方法

权利要求书

1.一种抗流感病毒物质的筛选方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1).将作为捕捉试剂的一种流感病毒RNA聚合酶亚基或其片段结合在固相载体表面上；

(2).将天然产物提取物和所述捕捉试剂接触；

(3).将步骤(2)中接触后的捕捉试剂与任选地连接有标签的另一种流感病毒RNA聚合酶亚基或其片段接触，其中所述流感病毒RNA聚合酶亚基或其片段能与步骤(1)中所述的流感病毒RNA聚合酶亚基或其片段形成二元复合物；

(4).将步骤(3)中接触后的捕捉试剂与能和上述另一种流感病毒RNA聚合酶亚基或其片段结合的可检测物质接触，或将步骤(3)中接触后的捕捉试剂与能和上述标签结合的可检测物质接触；

(5).用针对所述可检测物质的检测工具测定结合于捕捉试剂的所述另一种流感病毒RNA聚合酶亚基或其片段的水平；和

(6).根据所述测定的水平确定作为抗流感病毒物质的所述天然产物提取物。

2.根据权利要求1的筛选方法，其特征在于：其中步骤(6)具体包括将所述测定的水平与阳性和阴性对照水平进行比较，选择具有低于阳性对照水平，且高于或等于阴性对照水平的所述测定的水平的天然产物提取物作为抗流感病毒物质。

3.根据权利要求1或2的筛选方法，其特征在于：其中所述流感病毒为甲型流感病毒。

4.根据权利要求3的筛选方法，其特征在于：其中所述甲型流感病毒包括甲型人流感病毒、甲型禽流感病毒和甲型猪流感病毒。

5.根据权利要求4的筛选方法，其特征在于：其中所述甲型流感病毒为甲型禽流感病毒。

6.根据权利要求1或2的筛选方法，其特征在于：其中所述天然产物提取物制备自单味中药、按中药处方规定的药材种类和用量组成的混合物、未进行药用开发的动植物品种、海洋生物和微生物。

7.根据权利要求1或2的筛选方法，其特征在于：其中所述标签选自GST、Myc、HA、Flag、His₆、生物素。

8.根据权利要求1或2的筛选方法，其特征在于：其中所述可检测物质是任选地带有标记的抗体，并且所述标记是酶。

9.根据权利要求8的筛选方法，其特征在于：所述步骤(5)具体包括：

a.当所述抗体带有酶标记时，利用包含所述酶标记的底物的检测工具测定结合于捕捉试剂的所述另一种流感病毒RNA聚合酶亚基或其片段的水平；

b.当所述抗体不带有酶标记时，利用包含与所述抗体特异性结合的带有酶标记的另一种抗体和所述酶标记的底物的检测工具测定结合于捕捉试剂的所述另一种流感病毒RNA聚合酶亚基或其片段的水平。

10.根据权利要求9的筛选方法，其特征在于：其中所述酶标记的底物与相应的酶标记作用后显色、发荧光或导致化学发光。

11.根据权利要求8-10任一项的筛选方法，其特征在于：其中所述酶选自辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶或β-D-半乳糖苷酶。

12.根据权利要求1-11任一项的筛选方法筛选得到的抗流感病毒物质在制备治疗和/或预防流感病毒药物中的应用。

13.根据权利要求12所述的应用，其特征在于：其中所述抗流感病毒物质选自中药提取物，所述中药选自丁香、老鹤草、血见愁或余甘子。

14.一种治疗和/或预防流感病毒的药物组合物，其特征在于：所述药物组合物包括由权利要求1-11任一项所述筛选方法筛选得到的抗流感病毒物质。

15.根据权利要求14所述的药物组合物，其特征在于：所述抗流感病毒物质选自中药提取物，所述中药选自丁香、老鹤草、血见愁或余甘子。