[发明专利]Aspochalasin U及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种拮抗TNF-α活性新化合物，尤其是涉及一种拮抗肿瘤坏死因子-α的一种新结构化合物的分离纯化方法和应用。

背景技术

肿瘤坏死因子-alpha(TNF-α)的过表达是导致目前临床上尚不能完全医治的多种疾病，如内风湿性关节炎、g罗恩病、脑细胞缺血性坏死等的一个重要原因。目前，针对这类疾病采取的治疗方式是延缓和阻止疾病的进展、减轻疾病造成的疼痛，包括采用糖皮质激素(如强的松)、非甾体抗炎药(如COX-2抑制剂)和免疫抑制剂(如阿贝西普)，但这类药物均不能根治疾病。针对TNF-α的蛋白质性质开发出的抗体类拮抗剂类药物，如依那西普(Etanercept)、英夫利昔(Infliximab)、阿达木单抗(Adalimumab)等，能利用抗原-抗体相互结合的特性与过量表达的TNF-α结合，起到拮抗TNF-α的作用。但这类生物拮抗剂价格昂贵，一年的治疗费用约需1万美元，而且只能采取注射的方式给药，这给患者带来诸多不便。小分子的可口服的TNF-α抑制剂药物，具有TNF-α生物拮抗剂作用靶点明确的优点，又没有给药不便的弊病，是目前亟待开发的新型药物，但到目前为止，尚没有一个针对TNF-α过表达的小分子药物问世。

中国专利CN101485661公开一种青藤碱衍生物通过拮抗TNF-α信号通路治疗自身免疫病，即如式I的青藤碱衍生物的用途，它可用于制备预防或治疗自身免疫疾病的组合物。该发明还公开了式I化合物在制备肿瘤坏死因子-α(TNF-α)信号通路阻断剂组合物中的用途。

发明内容

本发明的目的在于提供一种Aspochalasin U及其制备方法和应用。

所述化合物Aspochalasin U是分离自曲霉F00685 Aspergillus sp.F00685在PDA培养基上的代谢产物，所述曲霉F00685 Aspergillus sp.F00685已于2011年5月19日保藏在中国典型培养物保藏中心，地址：中国，武汉，武汉大学，邮编430072，保藏中心保藏编号为CCTCCNO：M2011179。

所述曲霉F00685 Aspergillus sp.F00685分离自福建晋江东石晒盐厂，可称为真菌次级代谢产物Aspochalasin U。

所述Aspochalasin U的结构为：(3S，3aR，6S，6aR，12R，13R，151R，E)-6，12，13-trihydroxy-3-isobutyl-4，5，8-trimethyl-3，3a，6，6a，9，10，11，12，13，14-decahydro-1H-cycloundeca[d]isoindole-1，15(2H)-dione，其结构式如下：

所述Aspochalasin U的分子式为C₂₄H₃₇NO₅，分子量为419；白色粉末，易溶于甲醇、丙酮等有机溶剂，难溶于氯仿等低极性溶剂。该化合物的结构为尚未见报道的新结构。在TNF-α拮抗剂筛选的细胞模型上，该化合物表现出中等的拮抗活性，该化合物在制备抗炎症药物或具有其他生物活性的先导物中应用。

所述Aspochalasin U的制备方法如下：

1)将曲霉F00685 Aspergillus sp.F00685发酵；

在步骤1)中，所述发酵可采用葡萄糖-土豆-琼脂培养基，所述葡萄糖-土豆-琼脂培养基的配方为葡萄糖20g，土豆200g，琼脂15g，半海水定容至1L，121℃灭菌20min；所述土豆可切碎，煮沸30min，4层纱布过滤，保留滤液。

2)划线接种于半海水PDA平板上，培养活化，待菌落长出后重新接种到新鲜的半海水PDA平板上，待菌落布满整个平板且产孢后作为种子板；

在步骤2)中，所述培养活化的温度可为28℃。

3)将种子平板划成3mm×3mm的小块，以挑块的方式接种半海水固体PDA发酵平板后培养，即得Aspochalasin U。

在步骤3)中，所述培养的条件可置于28℃培养箱培养14天。

以下给出Aspochalasin U的分离纯化方法如下：

1)将上述步骤3)所获得的培养物切成边长约0.5cm小块后，用乙酸乙酯、甲醇和冰醋酸混合溶液浸提，所述乙酸乙酯、甲醇和冰醋酸按体积比为乙酸乙酯∶甲醇∶冰醋酸＝80∶15∶5；所述浸提可浸提3～4次，再将滤液减压浓缩至干，得提取物浸膏；