[发明专利]一种检测抗线粒体抗体M2型的试剂装置及其方法

说明书

技术领域

本发明申请涉及一种检测抗线粒体抗体M2型的试剂装置及其方法，属于临床免疫学检测技术领域。

背景技术

原发性胆汁性肝硬化(PBC)是一种慢性进行性疾病，在女性中多见，是由于肝内中小胆管进行性破坏并伴有门脉炎症性改变，进一步发展为纤维化、肝硬化，临床表现为进行性肝功能异常。早期表现为皮肤瘙痒、嗜睡、肝区隐痛，晚期出现黄疸、肝腹水、肝硬化。PBC是一种自身免疫性疾病，80％的患者伴有其他的免疫性疾病。PBC患者的血清中可检测到抗线粒体(AMA)抗体M2型、抗核抗体、抗核孔复合物抗体等多种自身抗体，其中以抗线粒体抗体M2型为特征性免疫学异常。

AMA-M2的靶位是支链2-氧酸脱氢酶复合物家族成员，包括丙酮酸脱氢酶复合物E2亚单位、支链2-氧酸脱氢酶复合物、酮戊二酸脱氢酶复合物和二氢硫辛酰胺脱氢酶结合蛋白。AMA-M2抗体检测是诊断PBC的有效手段。

临床检测抗线粒体抗体M2型的常见方法包括间接免疫荧光法、免疫印迹法、酶联免疫吸附试验的方法，但这些方法都存在着不足之处。

一、间接免疫荧光法

该法的基本原理是用特异性的抗体与载玻片中的抗原结合后形成抗原抗体复合物，继用荧光抗体与抗原抗体复合物结合，形成抗原抗体荧光复合物。在荧光显微镜下，根据复合物的发光情况来确定所检测的抗体。该方法评价：由于结合在抗原抗体复合物上的荧光抗体增多，发出的荧光亮度强，因而其敏感性强。但是其不足也是明显的：

(1)在分析结果时无法根据分子量的大小区分非特异性识别；

(2)操作相对复杂，需要价格较昂贵的荧光显微镜，在很多基层医院难以推广，也不太适用于标本量较多的实验室；

(3)荧光测定中的本底较高，荧光免疫技术用于定量测定有一定困难；

(4)结果判定需要有经验的专业人员，分析结果的客观性不足；

(5)只能进行定性检测，不能进行定量测定。

二、免疫印迹法

免疫印迹是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。其不足之处在于：

(1)只能进行定性和半定量分析，无法得出被检物质具体的量。

(2)操作步骤繁琐，试验用时较长。

(3)检测的灵敏度还有待提高。

三、酶联免疫吸附法

酶联免疫吸附法(ELISA)被广泛应用于检测抗线粒体抗体M2型，但该方法也存在着下述的不足之处：

(1)使用12×8型、6×8型、8×12型或整板型96孔专用微孔板作为抗原包被用具和反应容器，在使用时只能分成12批次、6批次、8批次或整板一次使用，无法进行独立的、单人份的检测；

(2)定量测定所用的试剂种类较多，每一种检测试剂都要用试剂瓶来盛装，并且每使用一种试剂时都需要更换吸液嘴来分别加注到微孔板的微孔中，不但试剂瓶种类多，加注试剂的操作也极为繁琐；

(3)缺少对检测信息的相应标注，只能通过查看试剂盒外包装盒的标识才能了解或知悉检测试剂的生产批号及有效期信息，而且所知悉的信息在检测过程中不受控，具有很大的随意性；

(4)检测试剂在检测过程中处于开放的空间，容易引起各种试剂之间的交叉污染而影响检测结果的准确性；

(5)检测过程多采用手工操作，试剂或样本的加量不很精确，操作过程极为繁琐和复杂，容易发生操作差错，检测结果的准确度和精密度较差；

(6)在检测项目成套试剂的数量配置及使用上均为项目数×48/96人份，如果需要检测10个项目，则试剂的配置及使用数须为10×48/96人份，如果只有一份样本需要检测10个不同的项目，也需要配置10×48/96人份的试剂，存在着不够经济合理的缺点。

发明内容

本发明专利申请即是针对目前对于抗线粒体抗体M2型的检测中存在的上述不足之处，提供一种能够进行独立单人份检测的试剂装置及其检测方法。

本发明专利申请基于酶联免疫检测的原理来实现抗线粒体抗体M2型的检测，是一种独立的、单人份的、一次性的检验方法；进一步的，本发明申请还提供了与该方法配套的相应的试剂装置，该试剂装置将抗线粒体抗体M2型酶联免疫检测所需要的多种试剂盛装在一个独立的、多孔结构的试剂装置内，通过分步加注移弃完成检测步骤；进一步的，所述的试剂装置还可以通过专用的免疫分析仪进行相应的全自动检测。

本发明申请的目的之一是提供一种检测抗线粒体抗体M2型的试剂装置，该目的是通过下述的技术方案实现的：