[发明专利]检测非对称二甲基精氨酸含量的胶乳增强免疫比浊法试剂盒

说明书

技术领域

本发明提供了一种利用免疫比浊方法测定人血清、血浆样本中非对称二甲基精氨酸含量的试剂盒，具体涉及利用人血清、血浆样本中非对称二甲基精氨酸和交联有非对称二甲基精氨酸-人血清白蛋白复合体的胶乳悬浮液竞争结合鼠抗非对称二甲基精氨酸单克隆抗体，通过检测免疫浊度的下降，达到较高的灵敏度和较宽的检测范围，属于医学免疫体外诊断领域。

背景技术

非对称二甲基精氨酸(asymmetric diethylarginine，ADMA)是一种天然氨基酸，广泛存在于组织和细胞中。它能抑制一氧化氮合成酶(nitric oxide synthase，NOS)的合成及由此而产生的生物学效应，阻止内皮细胞一氧化氮(NO)的合成，导致血管内皮功能降低。血浆ADMA浓度的变化与血管内皮功能损害、动脉粥样硬化、脑梗死、高血压、高脂蛋白异常、糖尿病、肾功能衰竭等血管性病变的严重程度密切相关，是目前临床研究的重点课题之一。可以说，血浆ADMA的浓度是内皮功能不全和心血管疾病的危险因子。

ADMA在体内由精氨酸甲基转移酶生成，精氨酸甲基转移酶有两种类型：I型甲基化组蛋白和核内RNA-结合蛋白生成NG-单甲基-L-精氨酸(NG-monomethyl-L-arginine，L-NMMA)和ADMA；II型仅甲基化髓磷脂主要蛋白产生L-NMMA和对称性二甲基精氨酸(symmetricdimethylarginine，SDMA)。L-NMMA和ADMA均能降低NOS的活性，但前者血浆浓度大约是ADMA的1/20，因此，大多数研究都针对ADMA的检测。SDMA在血浆中的浓度与ADMA相似，但对NOS没有效应。

测定血浆中ADMA的方法包括高效液相色谱、酶联免疫和免疫荧光等。但是生物样品中ADMA的测定比较烦琐，因为存在精氨酸和SDMA与ADMA在检测中表现交叉反应性。ADMA与精氨酸的不同仅在于一个胍基氮上的两个甲基。此外，正常人血清中精氨酸的浓度大约是ADMA浓度的100倍。SDMA比精氨酸更接近于ADMA，不同之处仅在于一个甲基的位置。在正常人血清中，SDMA的浓度与ADMA的浓度相当，大约为1uM。

不仅如此，上述检测ADMA的方法，都存在样品处理烦琐、手工操作、耗时间长的特点。因此，发明一种特异性检测人血浆中ADMA，同时能够应用到自动化仪器上的试剂盒成为非常之需。

发明内容

因此，本发明的技术目的在于提供一种能够应用到全自动化生化分析仪器上的非对称二甲基精氨酸检测试剂盒，能够快速、准确的检测人血浆样本中的非对称二甲基精氨酸含量。

因此，本发明的第一方面涉及一种测定非对称二甲基精氨酸含量的胶乳增强免疫比浊法试剂盒，其特征在于，包括：

1)非对称二甲基精氨酸R1试剂；

2)非对称二甲基精氨酸R2试剂；

3)非对称二甲基精氨酸校准品；

所述非对称二甲基精氨酸R1试剂包括非对称二甲基精氨酸特异性单克隆抗体、缓冲液、稳定剂、促凝剂和防腐剂；

所述非对称二甲基精氨酸R2试剂包括非对称二甲基精氨酸-惰性蛋白复合体包被的胶乳颗粒、缓冲液、稳定剂和防腐剂；

所述非对称二甲基精氨酸校准品是由非对称二甲基精氨酸、缓冲液、稳定剂和防腐剂组成。

优选地，所述非对称二甲基精氨酸-惰性蛋白复合体是通过偶联剂将非对称二甲基精氨酸和惰性蛋白偶联后而获得。优选地，所述偶联剂选自碳化二亚胺(EDAC)、戊二醛、二异氰酸化合物和二卤化二硝基苯中的一种。

优选地，所述的惰性蛋白选自人血清白蛋白、牛血清白蛋白、牛转铁蛋白、血蓝蛋白中的一种。

优选地，所述胶乳颗粒是一种核壳结构，乳核是聚苯乙烯聚合物，乳壳由苯乙烯、丙烯酸正丁酯和甲基丙烯酸共聚物组成。

优选地，所述胶乳颗粒根据其表面所带的化学基团不同可以选自羧基、氨基、羟基、酰肼基、氯甲基修饰的一种。

优选地，所述胶乳颗粒直径范围为50-250nm，使用浓度选自0.05-0.5％。

优选地，所述非对称二甲基精氨酸-惰性蛋白复合体可以通过与胶乳颗粒本身携带的化学基团通过化学键结合在胶乳颗粒表面，常用的化学基团包括羧基、氨基、羟基、酰肼基、氯甲基等，本发明通过优化的化学交联方法将非对称二甲基精氨酸-惰性蛋白复合特异性的结合在胶乳颗粒表面的羧基上，所述优化的化学交联方法可以概括为“一步双pH”法。