[发明专利]去除人同源性的肺炎链球菌表面蛋白A、纯化方法及用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种肺炎链球菌表面蛋白A的部分序列替换的去除人同源性的肺炎链球菌表面蛋白A，表达，纯化方法及用途。

背景描述

肺炎球菌(Streptococcus pneumoniae)，又称肺炎链球菌，是有荚膜的革兰氏阳性双球菌。多糖荚膜是主要的毒力因子，根据荚膜的组成差异，已鉴定出约90个不同的肺炎球菌血清型。肺炎球菌可引起肺炎、脑膜炎、败血症、中耳炎等疾病，在2岁以下婴幼儿和老年人中发病率最高，已成为世界范围内引起死亡的重要原因之一。据WHO 2005年估计，全球每年有160万人死于各类肺炎球菌疾病，其中包括70-100万5岁以下的儿童，多数死亡病例发生在发展中国家。在我国，肺炎也是导致婴幼儿死亡的头号杀手之一。HIV感染以及与免疫缺陷相关的其他疾病大大增加了感染肺炎球菌疾病的可能性。日益增加的肺炎球菌耐药性问题也使开发疫苗以控制肺炎球菌性疾病变得更为迫切。当前，甲型H1N1流感在全球肆虐，由其引发的呼吸道并发感染肺炎往往导致极大的死亡率，各国政府在大力投入开发该流感疫苗的同时倡导接种肺炎球菌疫苗。为了降低肺炎球菌感染与携带率，保障人民健康，预防与遏制疾病蔓延，接种肺炎球菌疫苗非常必要。WHO在2007年建议发展中国家将肺炎球菌结合疫苗纳入国家免疫计划。

目前市场上供应的肺炎球菌疫苗产品主要为多糖疫苗和结合疫苗。其中23价肺炎球菌荚膜多糖疫苗的抗原为胸腺非依赖型，对婴幼儿及老年人的免疫效果弱，主要用于有肺炎球菌性疾病高风险的大龄儿童和成年人，不能用于2岁以下的儿童。蛋白多糖结合疫苗如7价肺炎结合疫苗(PCV-7)，在各年龄组的免疫原性都很强，但目前只批准用于5岁以下儿童，且其只覆盖的7个血清型，仅占亚洲地区致病血清型的55％，使得应用过程中可能出现血清型的替换。目前PCV-7的国内市场价860元/剂，2岁以下幼儿需接种3-4次，价格较高。国内外肺炎疫苗市场巨大，开发新型高效且低成本的疫苗势在必行，国内外正在加紧研制重组蛋白疫苗及DNA新型疫苗。重组蛋白疫苗的开发主要集中在PspA、PsaA和溶血素等重要候选蛋白上，其中PspA是最具有潜力且研究最多的候选蛋白之一。

PspA，肺炎球菌表面蛋白A，广泛存在于90种肺炎球菌血清型中，不同血清型的肺炎球菌PspA蛋白分子质量不同，介于60～100Ka。PspA分子可分为两大家族，五个亚群(clade)。PspA主要由五个域组成：从N端到C端依次分为信号肽、超螺旋区、组氨酸富集区、胆碱结合区和C端尾巴。超螺旋区是一个重要的抗原决定区域。单克隆抗体识别的位点在N端，该区具有高度可变性。在不同血清型中，PspA的C端疏水区具有保守结构。PspA主要作用是与乳铁蛋白结合使之丧失功能并抑制补体活化，降低C3b在肺炎球菌表面的沉淀从而干扰补体介导的吞噬调理作用。该蛋白具有高效的免疫原性，在小鼠中研究证明，PspA蛋白可以激发对肺炎球菌感染的保护性免疫反应。

Sanofi Pasteur(赛诺菲-巴斯德)和University of Alabama at Birmingham(UAB)合作研发PspA疫苗，并完成了两个疫苗产品的临床一期实验，结果证明有非常好的保护作用。但在采用PspA(RX-1亚型)作为保护性抗原进行试验时，同时也在部分试验者身上观察到抗人体心肌肌球蛋白的抗体短暂升高。抗心肌蛋白抗体在人体中正常存在，目前尚且缺乏显示抗心肌肌球蛋白抗体可导致疾病的临床证据，但是仍存在安全隐患，对PspA疫苗的应用推广带来巨大障碍，降低PspA和心肌蛋白交叉反应非常必要。

发明内容

本发明的目的是克服野生型肺炎表面蛋白A作为抗原的不足，提供一种去除人同源性的肺炎链球菌表面蛋白A。

本发明的第二个目的是提供一种表达去除人同源性的肺炎链球菌表面蛋白A的用途。

本发明的第三个目的是提供一种表达去除人同源性的肺炎链球菌表面蛋白A的基因。

本发明的第四个目的是提供一种含有表达人同源性的肺炎链球菌表面蛋白A基因重组载体。

本发明的第五个目的是提供一种含有人同源性的肺炎链球菌表面蛋白A基因重组载体的菌株。

本发明的第六个目的是提供一种去除人同源性的肺炎链球菌表面蛋白A的纯化方法。

本发明的技术方案概述如下：

去除人同源性的肺炎链球菌表面蛋白A，是序列表SEQ ID No.1所示的氨基酸序列或是序列表SEQ ID No.2所示的氨基酸序列。

上述去除人同源性的肺炎链球菌表面蛋白A在制备预防肺炎链球菌感染的疫苗中的应用。