[发明专利]一种在恒温热源下进行聚合酶链式反应的方法及装置无效
申请号: | 201110456811.9 | 申请日: | 2011-12-23 |
公开(公告)号: | CN103173434A | 公开(公告)日: | 2013-06-26 |
发明(设计)人: | 葛胜祥;周文彬;张师音;陈清瑞;夏宁邵 | 申请(专利权)人: | 厦门万泰沧海生物技术有限公司;厦门大学 |
主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10;C12M1/00;C12M1/38;C12M1/34;C12Q1/68 |
代理公司: | 中国国际贸易促进委员会专利商标事务所 11038 | 代理人: | 罗菊华 |
地址: | 361022 福*** | 国省代码: | 福建;35 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 恒温 热源 进行 聚合 链式反应 方法 装置 | ||
1.一种通过热对流进行聚合酶链式反应的方法,该方法包括:
(1)提供一端开口的反应容器,在其中加入核酸扩增反应物,任选地所述聚合酶链反应产物中包含荧光染料或探针;
(2)在该开口容器内部或外部提供一个或多个可控制温度的恒温装置,所述恒温装置被构造成用于提供高于变性的温度,和供给或移走热量控制退火与延伸的温度,并且通过接触在反应容器的不同部位,建立管壁和管内空间的上下温度梯度分布以使管内液体产生稳定的对流;
(3)利用管内液体对流进行聚合酶链式反应;以及;
(4)任选地对热对流聚合酶链式反应产物进行检测,例如实时监测。
2.权利要求1的方法,其中所述恒温装置是一个或多个。
3.权利要求1的方法,其中在反应容器内,位于扩增反应物上方加入低密度的不易挥发物质,防止试剂蒸发并使光源穿透。
4.权利要求1的方法,其中所述反应管具有高透明度的密闭盖,用于防止试剂蒸发并使光源穿透。
5.权利要求1的方法,其中所述扩增反应物内包含有利建立热对流且不影响反应的化学物质。
6.权利要求1的方法,其中增加扩增反应物体积以增加纵向的试剂反应空间。
7.权利要求1的方法,其中温度控制方法利用固体、液体、气体、光线或是微波加热或冷却反应混合物。
8.权利要求1的方法,其中还包括进行RNA反转录反应。
9.权利要求1的方法,其中反应物在热对流循环中会有荧光物质插入到的双链DNA中用于监测。
10.权利要求1的方法,其中在热对流循环中,特异的荧光探针被水解而产生荧光用于监测。
11.权利要求1的方法,其中在热对流循环中,特异的荧光探针杂交于靶序列上,可用于监测。
12.一种温控热对流聚合酶链反应装置,其中包含:
(a)扩增反应容器,其中可以容纳核酸扩增试剂;
(b)一个或多个可控制温度的恒温装置;
(c)扩增反应容器间的隔热装置;以及
(d)任选地,实时荧光检测装置;其中
通过不同的恒温热源接触在扩增反应容器的上下部位,能够建立管壁和管内垂直空间的温度梯度分布。
13.权利要求12的核酸扩增装置,扩增反应容器为管状或柱状,一端开口,另一端封口,优选所述反应容器由选自玻璃、聚丙烯(PE)、聚醚砜(PES)、丙烯(PP)、聚丙酸酯(PC)和聚砜(PSF)等的材料制成。
14.权利要求12的核酸扩增装置,其中所述隔热装置是绝热材料,优选为任何热传导系数低的材料,更优选选自玻璃纤维棉、木头、耐热泡棉、云母片、耐热塑料等或其组合。
15.权利要求12的核酸扩增装置,其适用于由反应管下方射入激发光束,在反应管上方由检测器收光。
16.权利要求12的核酸扩增装置,其适用于由反应管上方射入激发光束,在反应管下方由检测器收光。
17.权利要求12的核酸扩增装置,其适用于由反应管上方射入激发光束,在反应管侧面由检测器收光。
18.权利要求12的核酸扩增装置,其适用于由反应管下方射入激发光束,在反应管侧面由检测器收光。
19.权利要求12的核酸扩增装置,其适用于由反应管上方射入激发光束,在反应管上方由检测器收光。
20.权利要求12的核酸扩增装置,其适用于由反应管下方射入激发光束,在反应管下方由检测器收光。
21.权利要求12的核酸扩增装置,其适用于由反应管侧面射入激发光束,在反应管侧面由检测器收光。
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