[发明专利]一种细胞分离介质及细胞分离方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种复方细胞分离介质及细胞分离方法。

背景技术

细胞治疗技术如免疫细胞治疗、干细胞治疗极大的推动了现代医学技术的发展。在细胞治疗过程中，目标细胞的采集与分离是的一个重要步骤。高纯度目标细胞的获取是得到优良质量的细胞终产品即效应细胞的前提。在细胞治疗过程中，除了需要用到治疗用的效应细胞外，还有一类为获取效应细胞而用到的辅助产品即细胞治疗辅料，用于效应细胞的分离、生长、存储、运输及输注等诸多环节，由于不在细胞治疗的终产品中出现，其重要性通常被忽略。

密度梯度离心法(Density Gradient Centrifugation)作为一种传统的分离技术，用于细胞分离已经存在了半个世纪。基于密度梯度离心法的细胞分离介质产品即细胞治疗辅料，例如GE公司的Ficoll-PaquePLUS，已成为利用密度梯度离心法进行细胞分离的常规介质，特别是用于淋巴细胞的分离，其说明书推荐的相应操作步骤也已成为本领域技术人员公知的操作步骤。一般步骤包括：在离心管中加入一定体积的淋巴细胞分离介质，待分离的血液样品平铺于分离介质上，接着对其在恒定温度下进行低速离心。样品中各细胞群将由于密度差异分布在离心管的不同部位，例如，如果分离介质具有与目标细胞群相同的密度，目标细胞将富集在分离介质层与样本层的交界面，用吸管将该层细胞吸出就达到了对目标细胞群的分离。由于Ficoll-Paque PLUS本身并不在终产物中出现，其属于一种典型的细胞治疗辅料。

淋巴细胞作为一种效应细胞，广泛存在于人外周血液、骨髓或人脐带血中。高纯度的淋巴细胞的获取对于疾病的细胞学诊断、成分输血、治疗用细胞产品的制备等具有非常重要的意义。淋巴细胞分离介质是具有恒定密度、渗透压及pH值的混合体系。国际上传统的分离介质包括GE Healthcare公司的产品Ficoll-Paque^TM PLUS、Ficoll-Paque^TM PREMIUM；Axis-Shield公司的产品Lymphoprep^TM；Sigma公司的产品Histopaque以及Mediatech公司的产品Lymphocyte Separation Medium(LSM)等。上述商品化的淋巴细胞分离介质以Ficoll 400(聚蔗糖400)和泛影酸钠为主要成分，密度在1.073g/cm³和1.084g/cm³之间，渗透压在280mOsmol/kg和310mOsmol/kg之间，pH在6和9之间。为了提高产品的技术标准以适应细胞治疗特殊行业要求，GE Healthcare公司在2005年推出的产品Ficoll-Paque^TMPREMIUM不仅依据ISO13485：2003将生产在受到严格控制的环境中进行，更是根据欧洲GMP附件1中“无菌医药产品的制造”和美国药典USP<1043>关于细胞治疗辅料的建议，将内毒素控制在了0.12EU/ml的范围内，这个标准符合了静脉注射用药物对内毒素含量的要求。尽管如此，截至目前全球仍没有一种分离介质宣称可以用于临床治疗用途；上述产品的包装说明书和使用指导中均明确指出该产品的适用范围为研究而非体外诊断和治疗用途。