[发明专利]一种高纯度D-荧光素的制备和纯化方法

权利要求书

1.一种高纯度D-荧光素的制备方法，它是由2-氰基-6-甲氧基苯并噻唑和盐酸吡啶进行高温脱甲基反应，然后提取脱甲基反应产物，经柱层析纯化，最后将纯化的脱甲基产物2-氰基-6-羟基苯并噻唑与D-半胱氨酸进行缩合反应生成D-荧光素，纯化即得D-荧光素产品，其特征在于，所述的将纯化的脱甲基产物2-氰基-6-羟基苯并噻唑与D-半胱氨酸进行缩合反应生成D-荧光素，纯化即得D-荧光素产品是在充氮气的条件下，2-氰基-6-羟基苯并噻唑与D-半胱氨酸在碱性条件下进行缩合反应，反应完毕后在充氮气的条件下用有一定极性的非水溶性有机溶剂进行萃取，萃取后的水相用盐酸进行酸化，分离沉淀物，沉淀物用溶水性有机溶剂进行洗涤，离心去上清，沉淀物真空干燥，即获得高纯度D-荧光素产品。

2.根据权利要求1所述的高纯度D-荧光素的制备方法，其特征在于，所述的将纯化的脱甲基产物2-氰基-6-羟基苯并噻唑与D-半胱氨酸进行缩合反应生成D-荧光素，纯化即得D-荧光素产品，其具体步骤为：纯化后的脱甲基产物2-氰基-6-羟基苯并噻唑(M176≥85％)与D-半胱氨酸盐酸水合物按质量比1∶1～1.6在有一定极性的非水溶性有机溶剂中充氮混合，用饱和氮气的0.1～2mol/L的碳酸钾溶液在充氮气的条件下，调节其pH至8～9，反应5～60min，反应完毕在充氮气的条件下用有一定极性的非水溶性有机溶剂萃取，水相用0.2～1mol/L的盐酸调节pH至1～3，分离沉淀物，再用体积比为1～5∶1的水和甲醇混合液洗涤沉淀物，10000～15000r/min离心，去上清，沉淀物经真空干燥，即可获得高纯度D-荧光素产品。

3.根据权利要求2所述的高纯度D-荧光素的制备方法，其特征在于，所述的有一定极性的非水溶性有机溶剂为醇类、酯类或烃类或其混合物。 

4.根据权利要求2所述的高纯度D-荧光素的制备方法，其特征在于，所述的在有一定极性的非水溶性有机溶剂中充氮混合中的有一定极性的非水溶性有机溶剂为二氯甲烷，所述的用有一定极性的非水溶性有机溶剂萃取中的有一定极性的非水溶性有机溶剂为乙酸乙酯或二氯甲烷或体积比为1∶1的乙酸乙酯和水混合液或体积比1～5∶1的二氯甲烷和水的混合液。

5.根据权利要求2所述的高纯度D-荧光素的制备方法，其特征在于，所述的萃取次数为2～3次，所述的用体积比为1～5∶1的水和甲醇混合液洗涤沉淀物，洗涤次数为2次。

6.一种高纯度D-荧光素产品的纯化方法，其特征在于，将低纯度的D-荧光素产品在充氮气条件下，用碱性溶液溶解，然后在充氮气的条件下用有一定极性的非水溶性有机溶剂进行萃取，萃取后的水相用盐酸进行酸化，分离沉淀物，沉淀物用溶水性有机溶剂进行洗涤，离心去上清，沉淀物真空干燥，即获得高纯度D-荧光素产品。

7.根据权利要求6所述的高纯度D-荧光素产品的纯化方法，其特征在于，其具体步骤为：将低纯度的D-荧光素产品用饱和氮气的0.1～2mol/L的碳酸钾溶液在充氮气的条件下溶解，在充氮气的条件下再用有一定极性的非水溶性有机溶剂萃取，萃取后的水相用0.2～1mol/L的盐酸调节pH至1～3，分离沉淀物，再用体积比为1～5∶1的水和甲醇混合液洗涤沉淀物，10000～15000r/min离心，去上清，沉淀物真空干燥，即可获得高纯度D-荧光素产品。

8.根据权利要求7所述的高纯度D-荧光素产品的纯化方法，其特征在于，所述的有一定极性的非水溶性有机溶剂为醇类、酯类或烃类或其混合物。

9.根据权利要求8所述的高纯度D-荧光素产品的纯化方法，其特征在于，所述的有一定极 性的非水溶性有机溶剂为乙酸乙酯或二氯甲烷。

10.根据权利要求7所述的高纯度D-荧光素的制备方法，其特征在于，所述的萃取次数为2～3次，所述的用体积比为1～5∶1的水和甲醇混合液洗涤沉淀物，洗涤次数为2次。