[发明专利]包含突变SPR基因以及野生型TSP基因的细菌宿主菌株

权利要求书

1.重组革兰氏阴性细胞，其包含编码突变spr蛋白质的突变spr基因，并且其中细胞包含非重组野生型染色体Tsp基因。

2.根据权利要求1的细胞，其中所述突变spr基因编码的spr蛋白质在选自H145、N31、R62、I70、Q73、C94、S95、V98、Q99、R100、L108、Y115、D133、V135、L136、G140、R144、G147、H157和W174的一个或多个氨基酸处具有突变。

3.根据权利要求2的细胞，其中所述突变spr基因编码的spr蛋白质具有选自H145A、N31Y、R62C、I70T、Q73R、C94A、S95F、V98E、Q99P、R100G、L108S、Y115F、D133A、V135D、V135G、L136P、G140C、R144C、G147C、H157A和W174R的一个或多个突变。

4.根据权利要求3的细胞，其中所述spr蛋白质的一个或多个突变选自S95F、V98E、Y115F、D133A、V135D、V135G和G147C。

5.根据权利要求4的细胞，其中所述突变spr基因编码的spr蛋白质具有突变S95F和Y115F。

6.根据权利要求3的细胞，其中所述spr蛋白质突变为H145A。

7.根据任何前述权利要求的细胞，其中除了突变spr基因外，所述细胞与野生型细菌细胞是同基因的。

8.根据任何前述权利要求的细胞，其中所述细胞进一步包含编码DsbC的重组多核苷酸。

9.根据权利要求1-8中任何一项的细胞，其中所述细胞进一步包含一种或多种以下突变基因：

a.编码具有分子伴侣活性和降低的蛋白酶活性的DegP蛋白质的突变DegP基因；

b.突变ptr基因，其中所述突变ptr基因编码具有降低的蛋白酶活性的蛋白酶III蛋白质或其为敲除突变ptr基因；以及

c.突变OmpT基因，其中所述突变OmpT基因编码具有降低的蛋白酶活性的OmpT蛋白质或其为敲除突变OmpT基因。

10.根据任何前述权利要求的细胞，其中所述细胞为大肠杆菌。

11.根据任何前述权利要求的细胞，其中所述细胞包含编码目的蛋白质的多核苷酸序列。

12.根据权利要求11的细胞，其中所述细胞包含的载体含有编码DsbC的重组多核苷酸以及编码目的蛋白质的多核苷酸序列。

13.根据权利要求12的细胞，其中所述载体包含控制编码DsbC的重组多核苷酸以及编码目的蛋白质的多核苷酸序列的表达的启动子。

14.根据权利要求11-13中任何一项的细胞，其中所述目的蛋白质为抗体或其抗原结合片段。

15.根据权利要求14的细胞，其中所述抗体或其抗原结合片段对TNF具有特异性。

16.重组革兰氏阴性细菌细胞，其包含编码突变spr蛋白质的突变spr基因、野生型Tsp基因以及编码对TNF具有特异性的抗体或其抗原结合片段的多核苷酸序列。

17.根据权利要求16的细胞，其中所述细胞包含编码DsbC的重组多核苷酸。

18.用于生产目的重组蛋白质的方法，包括于培养基中在能够有效表达目的重组蛋白质的条件下，培养权利要求1-17中任何一项限定的重组革兰氏阴性细菌细胞，以及从所述重组革兰氏阴性细菌细胞的细胞周质和/或培养基中回收目的重组蛋白质。

19.根据权利要求18的方法，其中所述目的重组蛋白质回收自细胞周质和/或上清。

20.根据权利要求18或19的方法，其中所述细胞包含编码DsbC的重组多核苷酸，且细胞培养于能够有效表达编码DsbC的重组多核苷酸的条件下。

21.根据权利要求20的方法，其中编码目的蛋白质的多核苷酸序列以及编码DsbC的重组多核苷酸的表达是通过向培养基中添加诱导子而进行诱导的。

22.根据权利要求20或权利要求21的方法，其中所述方法进一步包括将目的重组蛋白质与DsbC相分离。