[发明专利]包含突变体SPR基因且具有降低的TSP活性的细菌宿主菌株

权利要求书

1.重组革兰氏阴性细菌细胞，其包含突变体spr基因，所述突变体spr基因编码在选自D133、H145、H157、N31、R62、I70、Q73、C94、S95、V98、Q99、R100、L108、Y115、V135、L136、G140、R144和G147的一个或多个氨基酸处具有突变的spr蛋白质，且其中细胞具有相比于野生型细胞降低的Tsp蛋白质活性。

2.根据权利要求1的细胞，其中所述突变体spr基因编码的spr蛋白质具有一个或多个选自D133A、H145A、H157A、N31Y、R62C、I70T、Q73R、C94A、S95F、V98E、Q99P、R100G、L108S、Y115F、V135D、V135G、L136P、G140C、R144C和G147C的突变。

3.根据权利要求2的细胞，其中所述突变体spr基因编码的spr蛋白质具有一个或多个选自S95F、V98E、Y115F、D133A、V135D、V135G和G147C的突变。

4.根据权利要求3的细胞，其中所述突变体spr基因编码的spr蛋白质具有突变S95F和Y115F。

5.根据权利要求2的细胞，其中所述突变体spr基因编码的spr蛋白质具有选自D133A,H145A和H157A的突变。

6.根据任何前述权利要求的细胞，其中所述细胞进一步包含一种或多种以下突变的基因：

a.编码具有分子伴侣活性和降低的蛋白酶活性的DegP蛋白质的突变的DegP基因；

b.突变的ptr基因，其中所述突变的ptr基因编码具有降低的蛋白酶活性的蛋白酶III蛋白质或为敲除突变的ptr基因；以及

c.突变的OmpT基因，其中所述突变的OmpT基因编码具有降低的蛋白酶活性的OmpT蛋白质或为敲除突变的OmpT基因。

7.根据任何前述权利要求的细胞，其中所述细胞包含突变的Tsp基因，其编码具有降低的蛋白酶活性的Tsp蛋白质或为敲除突变的Tsp基因。

8.根据权利要求7的细胞，其中除了突变的spr基因以及突变的Tsp基因以外，所述细胞基因组与野生型细菌细胞是同基因的。

9.重组革兰氏阴性细菌细胞，其具有相比于野生型细胞降低的Tsp蛋白质活性，和突变体spr基因，所述突变体spr基因编码能够抑制包含突变的Tsp基因的细胞表型的spr蛋白质，其中除了使Tsp蛋白质活性相比于野生型细胞降低所需的修饰以及突变的spr基因以外，细胞基因组与野生型细菌细胞是同基因的。

10.根据权利要求9的细胞，其中突变体spr基因编码的spr蛋白质具有一个或多个选自N31Y、R62C、I70T、Q73R、C94A、S95F、V98E、Q99P、R100G、L108S、Y115F、D133A、V135D、V135G、L136P、G140C、R144C、H145A、G147C、H157A和W174R的突变。

11.根据权利要求10的细胞，其中突变体spr基因编码的spr蛋白质具有一个或多个如权利要求1-5中任何一项限定的突变。

12.根据任何前述权利要求的细胞，其中所述细胞具有敲除突变的Tsp基因，其包含对基因起始密码子的突变和/或一个或多个位于基因起始密码子下游、基因终止密码子上游的终止密码子。

13.根据权利要求12的细胞，其中敲除突变的Tsp基因包含对基因起始密码子的错义突变产生的限制性标记物位点以及可选地包括一个或多个其他点突变。

14.根据权利要求13的细胞，其中敲除突变的Tsp基因包含SEQID NO:3。

15.根据任何前述权利要求的细胞，其中所述细胞为大肠杆菌。

16.根据任何前述权利要求的细胞，其中所述细胞包含编码目的蛋白质的多核苷酸序列。

17.根据权利要求16的细胞，其中所述目的蛋白质为抗体或其抗原结合片段。

18.根据权利要求17的细胞，其中所述抗体或其抗原结合片段对TNF具有特异性。